試驗方法

1、快速藥敏試驗：采取病料后直接涂布進行藥敏試驗，與病原菌分離同時進行，可根據(jù)藥敏結(jié)果初步進行治療。此種方法適用于發(fā)病初期病料組織，8-16小時可快速出具檢測結(jié)果。

2、前增菌培養(yǎng)法藥敏試驗：前增菌培養(yǎng)法耗時略長，需要2-3天的時間，先對細(xì)菌增菌培養(yǎng)后再進行藥敏試驗。此種方法可避免快速藥敏試驗由于無細(xì)菌生長或細(xì)菌生長較少、抑菌圈不明顯等而導(dǎo)致不能及時讀取結(jié)果的情況出現(xiàn)。

3、傳統(tǒng)法藥敏試驗：傳統(tǒng)法耗時較長，需要3-4天的時間，對于一般養(yǎng)殖場定期監(jiān)測病原菌及其敏感性時可以使用此方法。能較好地分離出病原菌，病原菌經(jīng)純培養(yǎng)后，進行藥敏試驗，得出的數(shù)據(jù)可以準(zhǔn)確反應(yīng)出病原菌對某一藥物的敏感性。

操作方法

1、快速藥敏實驗

（1）樣品處理：用燒灼的滅菌刀片燙灼組織表面雜菌，無菌操作用剪刀剪取組織，置于滅菌平皿中，滴加適量生理鹽水，剪碎并混勻組織，呈糊狀最佳。

（2） 涂板：用滅菌棉簽沾取病料組織混懸液，均勻涂抹于營養(yǎng)瓊脂平板上，反復(fù)2次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60度，最后沿周邊繞兩圈，確保涂抹均勻。

（3） 貼藥敏紙片及培養(yǎng)：用鑷子夾取藥敏紙片平放在瓊脂平板上，并輕壓使緊貼于瓊脂平板表面，藥敏紙片一旦接觸培養(yǎng)基表面不要再移動。在培養(yǎng)基中央貼一片，外周以等距離貼若干種紙片，一個平板（直徑90毫米）可貼6-7個抗菌藥敏片，并標(biāo)記每個藥敏片的藥名。貼好紙片的平板于37℃培養(yǎng)16-24小時觀察結(jié)果。

2、前增菌培養(yǎng)法藥敏實驗

（1） 樣品處理：用滅菌棉簽沾取組織內(nèi)部，然后打開裝有增菌液（營養(yǎng)肉湯）的試管，使棉簽與增菌液混合，反復(fù)擠壓5次，取出棉簽過火焰燒灼滅菌棄掉。試管口和試管塞過火焰滅菌，蓋上試管塞，做好標(biāo)記，放入恒溫箱中37℃培養(yǎng)12-24小時，此肉湯菌液為前增菌液。

（2） 涂板：用滅菌棉簽沾取前增菌液或稀釋后增菌液，在管壁輕碰幾下，擠掉多余水分，均勻涂抹于營養(yǎng)瓊脂平板上，反復(fù)2次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60度，最后沿周邊繞兩圈，保證涂均勻。

（3） 貼藥敏紙片及培養(yǎng)：用鑷子夾取藥敏紙片平放在瓊脂平板上，并輕壓使緊貼于瓊脂平板表面，藥敏紙片一旦接觸培養(yǎng)基表面不要再移動。在培養(yǎng)基中央貼一片，外周以等距離貼若干種紙片，一個平板（直徑90毫米）可貼6-7個抗菌藥敏片，并標(biāo)記每個藥敏片的藥名。貼好紙片的平板于37℃培養(yǎng)16-24小時觀察結(jié)果。

3、傳統(tǒng)藥敏實驗

（1） 樣品處理：用燒灼的滅菌剪刀燙灼組織表面雜菌，用剪刀在病料組織中剪開一切口，用棉簽或接種環(huán)沾取組織病料，進行細(xì)菌分離，培養(yǎng)16-18小時后挑取接種平皿中菌落，置于無菌1.5ml離心管中，滴加500ul生理鹽水，混勻菌落。注意同時對分離細(xì)菌和進行藥敏實驗菌落進行染色，確定為同種致病菌。

（2） 涂板：用滅菌棉簽沾取菌落混懸液，均勻涂抹于營養(yǎng)瓊脂平板上，反復(fù)2次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60度，最后沿周邊繞兩圈，保證涂均勻。

（3） 貼藥敏紙片及培養(yǎng)：用鑷子夾取藥敏紙片平放在瓊脂平板上，并輕壓使緊貼于瓊脂平板表面，藥敏紙片一旦接觸培養(yǎng)基表面不要再移動。在培養(yǎng)基中央貼一片，外周以等距離貼若干種紙片，一個平板（直徑90毫米）可貼6-7個抗菌藥敏片，并標(biāo)記每個藥敏片的藥名。貼好紙片的平板于37℃培養(yǎng)16-24小時觀察結(jié)果。

觀察結(jié)果及判定標(biāo)準(zhǔn)

1、說明：經(jīng)培養(yǎng)后，凡對涂布的細(xì)菌有抑制能力的抗菌藥物，在其紙片四周出現(xiàn)一個無菌生長的圓圈，稱為抑菌圈?？捎弥背邷y量其抑菌圈的大小，抑菌圈越大，說明該菌對此種藥物敏感性越大，反之越小。若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。

2、判定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)《抗微生物藥物敏感性試驗執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)2010》中的判斷標(biāo)準(zhǔn)進行判斷，對于商品藥物，抑菌圈直徑＞20mm為極敏，15-20mm為高敏，10-14mm為中敏，＜10mm為低敏，0為耐藥。

3、注意事項

（1）制備紙片的濾紙要求吸水性好，均勻不含無關(guān)的化學(xué)物質(zhì)或色素。

（2）干燥的藥敏紙片必須在密封，放有干燥劑的容器中存放，以防受潮。

（3）藥敏紙片制備后立即用敏感細(xì)菌作藥敏試驗，并記錄其抑菌圈，每月復(fù)查一次。

（4）培養(yǎng)基要求是適合常見致病菌生長，不含被試藥物的拮抗劑。

（5）培養(yǎng)基厚度對抑菌圈大小有直接影響，要求3-4mm厚的平板。

（6）培養(yǎng)基PH值對某些藥物抑菌區(qū)影響很大，一般PH應(yīng)為7.2-7.4。

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