單克隆抗體技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)和免疫治療中發(fā)揮著重要作用，極大地促進了基因和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的研究。迄今為止，單克隆抗體經(jīng)歷了四個階段:鼠源單克隆抗體、嵌合單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人源單克隆抗體；成千上萬的單克隆抗體已被應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，在疾病的發(fā)病機制、診斷和治療中發(fā)揮著特殊的作用。本文將介紹單克隆抗體技術(shù)中B細胞單克隆抗體生成技術(shù)，并分析其在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用與前景。

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腫瘤免疫是一種通過重新啟動和維持腫瘤免疫周期以控制和清除腫瘤來恢復(fù)身體正?？鼓[瘤免疫反應(yīng)的方法，這對臨床轉(zhuǎn)移性腫瘤有重大影響，改變了許多類型腫瘤的護理標準。抗體是機體在抗原刺激下，由B淋巴細胞或記憶細胞衍生的漿細胞產(chǎn)生的特異性結(jié)合免疫球蛋白，是機體不可缺少的組成部分。其功能是與抗原結(jié)合，有效去除外來物，如入侵的微生物和寄生蟲等。

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抗體一般分為多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體是機體受到多種抗原決定因子刺激后，由多個B細胞克隆產(chǎn)生的，可以看作是多個單克隆抗體的混合物；單克隆抗體是可以靶向特定抗原決定簇的抗體，具有高特異性、強結(jié)合力、高純度、低成本和大規(guī)模生產(chǎn)的特點。迄今為止，單克隆抗體經(jīng)歷了不同的優(yōu)化和發(fā)展階段，包括小鼠單克隆抗體、人源單克隆抗體和全人單克隆抗體。

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人源化抗體概述示意圖

人源單抗是指通過基因克隆和DNA重組重建的小鼠單抗。該構(gòu)建形成了mAb的恒定部分(CH和CL區(qū)域)或人抗體基因編碼的mAb的所有部分，從而基本保留了原始鼠單抗的親和力和特異性，降低了其異質(zhì)性。作為應(yīng)用最廣泛的單克隆抗體，人源化單克隆抗體的優(yōu)勢在于可以克服人抗鼠抗體反應(yīng)，防止單克隆抗體作為外源蛋白被免疫系統(tǒng)快速清除，提高單克隆抗體的生物活性。目前，雜交瘤技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)、B細胞單克隆抗體生成技術(shù)等均可制備完全的人單抗。

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單克隆抗體(mAbs)的制備方法

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單B細胞單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展

早在2003年，Wardemann等人就利用從骨髓中分離的早期人類B細胞前體制備了自身反應(yīng)性抗體，以檢測自身反應(yīng)性B細胞的結(jié)構(gòu)、分化和沉默。2004年，Traggiai等人用EBV使分離的人記憶B細胞永生，并篩選出35種抗流感病毒的單克隆抗體，這使得記憶B細胞產(chǎn)生單克隆抗體成為可能。此后，單克隆B細胞生成單克隆抗體技術(shù)逐漸應(yīng)用于各種實驗研究，作為現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要工具，為生命科學(xué)多個領(lǐng)域的發(fā)展做出了巨大貢獻。

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近年來，隨著分子細胞生物學(xué)的發(fā)展，單B細胞抗體制備技術(shù)開始興起并逐漸得到廣泛應(yīng)用。這是因為單B細胞抗體技術(shù)制備的單克隆抗體具有全人源性、高特異性和統(tǒng)一性的特點，在病原微生物感染、腫瘤、自身免疫性疾病和器官移植等方面具有獨特的優(yōu)勢和良好的應(yīng)用前景。

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與其他單抗制備技術(shù)相比，單克隆B細胞技術(shù)是一種體外克隆和表達具有單一抗原特異性的B細胞抗體的技術(shù)，該技術(shù)保留了輕重鏈V區(qū)自然配對，具有基因多樣性好、效率高、充分人源化和所需細胞數(shù)量少的優(yōu)點。研究表明，人類記憶B細胞可以在人體內(nèi)存活50年以上，提供了宿主大部分時間內(nèi)產(chǎn)生的特定抗體的歷史記錄。相比之下，在大多數(shù)傳統(tǒng)方法中使用的體液中的抗體在大球蛋白清除后通常會衰減，這意味著人們在幾年內(nèi)就會失去保護性抗體。此外，有人提出病毒感染患者血液中的記憶B細胞可能存儲患者早期感染該病毒的基因記錄，這為單克隆抗體的研究和開發(fā)提供了新的方向。

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隨著B細胞分選技術(shù)的成熟和完善，以及PCR基因擴增方法和抗體基因的高通量分析鑒定，B細胞抗體制備技術(shù)將在診斷、藥效學(xué)和臨床應(yīng)用中發(fā)揮前所未有的重要作用，開創(chuàng)抗體研究的新時代。由于這種方法也成功地廣泛分離了針對SARS和H5N1流感病毒的中和抗體，它不僅可以為被動血清治療提供中和抗體，而且還可以為疫苗設(shè)計提供信息，并有望加速傳染病領(lǐng)域治療方法的發(fā)展。

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