摘要：種子是中藥產(chǎn)業(yè)的源頭，中藥材種子的準(zhǔn)確鑒定不僅關(guān)系到中藥材的真?zhèn)?，更關(guān)系到中藥的安全性和有效性。由于多數(shù)中藥材種子體積較小、內(nèi)含物豐富、形態(tài)特征易受種子成熟度和環(huán)境條件的影響，難以通過傳統(tǒng)方法進行有效鑒定。DNA條形碼技術(shù)利用一段標(biāo)準(zhǔn)的DNA序列從基因?qū)用鎸ξ锓N進行鑒定，不受環(huán)境等外部因素影響，具有通用、快速、準(zhǔn)確等特點，逐漸成為中藥材種子鑒定的研究熱點。簡述了DNA條形碼技術(shù)在中藥材種子鑒定中的研究現(xiàn)狀，分析了中藥材種子DNA條形碼鑒定的技術(shù)要點，總結(jié)了不同類型中藥材種子進行DNA條形碼鑒定的原則，并提出了利用宏條形碼技術(shù)鑒定市售混合中藥材種子的研究方法，為中藥材種子鑒定提供新的研究思路。

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近年來，隨著《中醫(yī)藥發(fā)展戰(zhàn)略規(guī)劃綱要（2016—2030年）》《中華人民共和國中醫(yī)藥法》等文件法規(guī)的頒布實施，我國加大了對中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的扶持力度。中藥材是中醫(yī)藥傳承和發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)，但野生資源破壞嚴(yán)重[1]，當(dāng)前主要依賴人工種植供應(yīng)。同時全國也在大力推進中藥材種植產(chǎn)業(yè)扶貧政策，中藥材的種植規(guī)模不斷擴大。中藥材種子作為中藥材種植的源頭，存在種源混亂、種質(zhì)混雜等現(xiàn)象，質(zhì)量參差不齊，鑒定錯誤的種子不僅會帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，也會給臨床用藥帶來極大的安全隱患。


傳統(tǒng)中藥鑒定方法如基原鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定，其研究對象主要為基原植物、藥材、飲片和中成藥，缺乏對中藥材種子的系統(tǒng)研究。此外，種子作為藥用植物的繁殖器官，多數(shù)質(zhì)量較輕、結(jié)構(gòu)簡單、內(nèi)含物豐富，其形態(tài)特征易受種子成熟度和外部環(huán)境的影響，難以通過傳統(tǒng)方法進行鑒定。DNA條形碼利用一段標(biāo)準(zhǔn)的DNA序列從基因?qū)用鎸ξ锓N進行鑒定[2-3]，不受植物生長環(huán)境、發(fā)育階段、樣品形態(tài)和組織部位的限制，彌補了傳統(tǒng)中藥鑒定方法對于中藥材種子鑒定的空缺，逐漸成為中藥材種子鑒定的研究熱點[4]。


1傳統(tǒng)方法在中藥材種子鑒定中的局限性


傳統(tǒng)的中藥鑒定方法如基原鑒定、性狀鑒定和顯微鑒定多利用中藥的外觀性狀和顯微特征進行鑒定。與傳統(tǒng)中藥學(xué)鑒定對象不同，中藥材種子的形態(tài)特征、外觀形狀和顯微特征易受環(huán)境和種子成熟度等因素影響，相同物種的種子往往存在形態(tài)差異[5]。理化鑒定多利用藥材內(nèi)含物的理化性質(zhì)差異進行鑒定，而中藥材種子是活的繁殖器官，其內(nèi)含物會隨著種子的成熟、儲藏時間以及萌發(fā)而消耗，內(nèi)含物的理化性質(zhì)也會發(fā)生改變。由于中藥材種子的特殊性，傳統(tǒng)中藥鑒定方法僅可以對種子類中藥材和部分中藥材種子進行鑒定。


2 DNA條形碼技術(shù)在中藥材種子鑒定中的應(yīng)用


DNA條形碼技術(shù)利用基因組中一段標(biāo)準(zhǔn)的、相對較短的DNA片段進行物種鑒定[6]。2010年，陳士林等提出ITS2為藥用植物的通用條形碼，相關(guān)研究表明ITS2序列能夠很好地鑒定傘形科[7]、蕓香科[8]、薔薇科[9]、豆科[10]、菊科[11]等多個科屬的藥用植物。在此基礎(chǔ)上，陳士林等[12]建立了以ITS2為核心、psbA-trnH為補充序列的藥用植物DNA條形碼鑒定體系，廣泛運用于中藥鑒定的各個領(lǐng)域，并納入《中國藥典》2015年版四部[13]，推動了中藥鑒定學(xué)的“文藝復(fù)興”[4]。相較于傳統(tǒng)方法，DNA條形碼技術(shù)以物種的遺傳信息為鑒定依據(jù)，不受植物生長環(huán)境、發(fā)育階段、樣品形態(tài)和組織部位的限制，具有通用性、客觀性、準(zhǔn)確性等特點。

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