Transwell：trans是轉移之意，well是小室之意，合起來的意思就是穿過小室，將小室置于培養(yǎng)板中，小室內稱為上室，培養(yǎng)板內稱為下室，小室底層有一張通透性的膜（一般為聚碳酸酯膜），將上下層培養(yǎng)液分隔開。被研究的細胞被培養(yǎng)在上室，由于聚碳酸酯膜有通透性，下室內培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響，且通過應用不同孔徑和經過不同方法處理的聚碳酸酯膜,就可以進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。

利用transwell侵襲實驗可以檢測腫瘤細胞的侵襲能力。未鋪膠的transwell實驗檢測細胞的遷移能力，鋪膠的transwell實驗檢測細胞的侵襲能力。遷移和侵襲是兩個概念。遷移是指細胞的運動能力，而侵襲是細胞在運動的同時會分泌出消化ECM的蛋白，清除運動障礙，這個實驗更能模擬人體內環(huán)境。

細胞遷移是細胞在外界信號（如：趨化因子）的作用下從一個區(qū)域轉移到另一區(qū)域的運動。這個過程在在生理和病理學方面都發(fā)揮著重要的作用，比如損傷修復、細胞分化、惡性腫瘤轉移、免疫細胞的遷移、組織修復等。

細胞侵襲與細胞遷移比較類似，但是“侵襲”需要細胞穿過胞外基質層（ECM）或基底膜基質層（BME），在這個過程中細胞先酶解去除ECM/BME的阻礙，從而在趨化因子濃度梯度驅使下完成從一處到另一處的移動。

實驗步驟

1.基質膠的準備：4℃隔夜解凍Matrigengel，實驗前轉移到冰盒中；將提前準備好的冰放置冰盒中，凝膠前的操作均在冰上操作。將槍頭、離心管與放有Transwell小室的24孔板放入冰盒預冷，并用預冷槍頭將Matrigengel混勻。

2.基質膠鋪板：稀釋Matrigengel，按Matrigenge和無血清培養(yǎng)基以1:8的比例進行稀釋；將稀釋后的Matrigengel，垂直加入Transwewll上室中，均勻平鋪在底部；放入培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2)中3h，使Matrigengel聚合成凝膠薄膜。將上室中多余液體吸掉，在每孔中加入無血清培養(yǎng)基，再置于培養(yǎng)箱30min，進行基底膜水化。

3.制作細胞懸液：制作細胞懸液前可先讓細胞撤血清饑餓12-24h，進一步去除血清的影響（此步驟可選擇操作）；取匯合度達70%-80%的細胞進行消化，終止消化后將棄廢液離心，接著用無血清培養(yǎng)基重懸細胞，調整細胞密度至2.5×105/mL。

4.接種細胞：在24孔板下室加入500μL含10%FBS培養(yǎng)基。然后用鑷子將Transwell小室置于24孔板內（注意：下層培養(yǎng)液和小室間經常會有氣泡產生，一旦產生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現氣泡，要將小室提起，去除氣泡，再將小室放進培養(yǎng)板）；每孔加入200μL細胞懸液到Transwell上室；培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后可進行固定染色。（時間點可根據腫瘤細胞侵襲能力而定，一般24-48h，還需要考慮細胞狀態(tài)和消化時間對細胞的影響。）

5.結果統計：用0.1%結晶紫染色5-10min，PBS洗3遍，除去未與細胞結合的結晶紫，用棉簽輕輕擦拭小室的上側，將非特異性結合于小室上表面的染料擦掉，以便后續(xù)鏡檢；適當風干后，在400倍顯微鏡下選取5個視野觀察細胞并計數。