1.Cell Counting Kit-8(cck-8)細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒工作原理

? ? ??Cell Counting Kit-8 (CCK-8)?細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒是百螢生物生產(chǎn)的一種基于 WST-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽 WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，WST-8 是一種類(lèi)似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（formazan)。WST-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺;顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線(xiàn)性關(guān)系。

2.?Cell Counting Kit-8(cck-8)細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒適用范圍

? ? ?本試劑盒可以用于生物活性因子的活性檢測(cè)、抗腫瘤藥物的篩選、細(xì)胞增殖的測(cè)定、細(xì)胞毒性檢測(cè)以及藥敏等與細(xì)胞活性和增值相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。

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3.下表是CCK法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較

MTT法：MTT法又稱(chēng)MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。

MTS法：以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)，比色分析對(duì)顯色反應(yīng)的基本要求是：反應(yīng)應(yīng)具有較高的靈敏度和選擇性，反應(yīng)生成的有色化合物的組成恒定且較穩(wěn)定，它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)和控制好適宜的反應(yīng)條件，是比色分析的關(guān)鍵。

SRB法：磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法，主要用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。SRB是一種粉紅色陰離子染料，易溶于水，在酸性條件下可特異性地與細(xì)胞內(nèi)組成蛋白質(zhì)的堿性氨基酸結(jié)合；在510 nm左右波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰，吸光值與細(xì)胞量成線(xiàn)性正相關(guān)，故可用作細(xì)胞數(shù)的定量檢測(cè)。

XTT法：XTT是一種與MTT類(lèi)似的四唑氮衍生物，可被活細(xì)胞線(xiàn)粒體脫氫酶還原成水溶性的棕色甲肷產(chǎn)物，當(dāng)XTT與電子偶合劑共同使用時(shí)，甲肷的生成量與細(xì)胞的增殖程度呈正相關(guān)。

WST-1法：WST-1是一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜（Formazan）。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類(lèi)似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。

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4.Cell Counting Kit-8(cck-8)細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒活力計(jì)算

細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

CCK-8實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵點(diǎn)（供參考）：

（1）種板數(shù)；

（2）種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間；

（3）加藥后的孵育時(shí)間；

（4）CCK-8試劑加入量；

（5）CCK-8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間。