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多肽熒光標記-FAM、FITC、Dansyl、TAMRA、Biotin等熒光技術(shù)

2023-03-28 11:50 作者:合生生物李  | 我要投稿

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異硫氰酸熒光素(FITC)比羧基熒光素活性更高,羧基熒光素在使用前需要激活。FITC主要與巰基反應(yīng),如還原型半胱氨酸的側(cè)鏈,尤其是多肽或蛋白中的氨基。

對于許多應(yīng)用來說,在化學(xué)合成過程中引入多肽熒光標記是很容易的。例如,在固相合成過程中,F(xiàn)ITC可以與賴氨酸(Lys)或選擇性地脫保護的鳥氨酸(ornithine)側(cè)鏈,或合成過程中多肽的N端氨基發(fā)生反應(yīng)。在N端標記時,建議在最后一個氨基與異硫氰酸酯和氨基反應(yīng)生成的硫脲鍵之間引入烷基間隔器(alkyl spacer),如氨基乙酸(Ahx)。

鏈接切割需要酸性環(huán)境,在N端標記FITC的多肽需要環(huán)化形成熒光素,通常伴隨著最后一個氨基酸的去除。然而,當有間隔劑時,如氨基乙酸,或當目標肽從樹脂通過非酸性環(huán)境切斷時,這是可以避免的。

空間位阻被認為是在熒光染料之前使用Ahx的主要原因,而不是FITC不能直接與多肽偶聯(lián)的原因。Ahx或b-Ala可作為FITC標記多肽的間隔物。

多肽熒光標記技術(shù)一般來說,生物素、FITC等染料可以任意標記在多肽的N端或C端上。但是我們推薦N端標記,成功率更高,時間更短,操作更簡單。由于多肽是從C端合成到N端,所以N端修飾是固相合成的最后一步,不需要額外的偶聯(lián)步驟。相反,如果是c端標記,則需要額外的步驟,過程將更加復(fù)雜。

我們可以提供超過300種多肽修飾服務(wù),包括氨基化、乙?;?、甲?;?、生物素、FITC標記肽、二硫鍵、磷酸化、KLH、BSA等,了解更多多肽熒光標記服務(wù)歡迎致電咨詢。


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