常規(guī)多肽的固相合成方法,看一遍就能自己合成簡單的肽段
本文章介紹固相多肽合成最常規(guī)的步驟,技術(shù)性偏簡單,做為參考。
一、樹脂溶脹
稱量取代度為1.0mmol/g的0.6g CTC Resin,將樹脂放入反應(yīng)管中,加DCM(大致15ml/g),振蕩30min。假如選用的時其它樹脂,通常會提前將第一個氨基酸與樹脂連接好,如Fmoc-Leu-Wang Resin,溶脹后直接進行第三部 脫保護操作。
二、縮合第一個氨基酸
通過沙芯抽濾掉溶劑,加入3倍摩爾過量的Fmoc-Leu-OH,加入少量DMF溶解,再加入6倍摩爾量的DIPEA,最后加入 2.85倍摩爾量縮合試劑HBTU,鼓氮氣0.5h。使用DMF洗滌3-4次,去少量樹脂(大約20多顆樹脂即可)進行茚三酮檢測,為無色。

三、脫保護
加15ml 20%哌啶/DMF溶液(15ml/g),5min,去掉再加15ml20%哌啶DMF溶液(15ml/g),15min。使用DMF洗滌5次,去少量樹脂(大約20多顆樹脂即可)進行茚三酮檢測,為藍色(或其他顏色)。
四、以此類推重復(fù)第二和第三步驟,最后用甲醇洗樹脂3次,并抽干。最終得到流沙狀的樹脂肽,例如:H2N-Gly-Arg(Pbf)-His(Trt)-Ile-Leu-CTC Resin。
五、切割
具體操作見多肽切割一文,已有很詳細介紹。
六、補充:
一般采用茚三酮檢測,加熱溫度為 110℃左右,加熱時間為3min。其溶液配比也有很多種,實驗者可以多嘗試一下。