技術(shù)背景：

二硫鍵（S-S 鍵）是通過(guò)蛋白質(zhì)中兩個(gè)半胱氨酸上的巰基 (-SH) 氧化而形成的，是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾形式。蛋白質(zhì)通過(guò)各種鏈間和鏈內(nèi)的半胱氨酸連接在一起，這對(duì)蛋白質(zhì)分子保持正確的高級(jí)結(jié)構(gòu)，維持蛋白質(zhì)的生物活性至關(guān)重要?？贵w藥物中二硫鍵的排布是對(duì)藥物結(jié)構(gòu)特性的一種反映，因此二硫鍵連接形式的確認(rèn)成為抗體藥物結(jié)構(gòu)確認(rèn)過(guò)程中具有非常重要的作用。

發(fā)展歷程及原理：

2016年，麻省理工學(xué)院的Bradley L.Pentelute及其同事，成功的開(kāi)發(fā)出了一種通過(guò)將π鉗序列 (Phe-Cys-Pro-Phe) 引入肽和蛋白質(zhì)中，從而達(dá)到可以只選擇性的修飾其序列中符合條件的半胱氨酸殘基的方法。

選擇性修飾半胱氨酸（Cys）殘基的過(guò)程中，是可以使用馬來(lái)酰亞胺的ligation或烷基化的，但這些方法的局限性在于它們都不能實(shí)現(xiàn)位置選擇性修飾。鑒于蛋白質(zhì)是通過(guò)自身的三維結(jié)構(gòu)來(lái)調(diào)節(jié)其交互和特定反應(yīng)的特征，由此得到了一個(gè)使用特定的序列來(lái)加速這個(gè)反應(yīng)的想法，于是研發(fā)出了一種新的方法。

全氟芳基與半胱氨酸（Cys）之間的芳香族親核取代反應(yīng)可以在有機(jī)溶劑中進(jìn)行，但其在水中的反應(yīng)速率卻非常緩慢。因此，在序列為Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Gly-Leu-Leu-Lys（Xaa為任意的氨基酸）的肽庫(kù)中，加入生物素-全氟芳基探針（即加入TEV蛋白酶中以切段可以分割的序列），再應(yīng)用使用了鏈霉親和素的下拉法后，可以鑒定出含有Phe-Cys-Pro-Trp序列的肽會(huì)優(yōu)先反應(yīng)。

使用由9個(gè)殘基組成的肽作底物進(jìn)行的反應(yīng)來(lái)作進(jìn)一步的檢驗(yàn)顯示：當(dāng)Xaa都是Phe時(shí)可以獲得一個(gè)比較理想的產(chǎn)率，而當(dāng)Xaa中的任一個(gè)從Phe變?yōu)镚ly或者當(dāng)Pro變成D-Pro時(shí)，產(chǎn)率便會(huì)有一個(gè)顯著的下降。

至此，成功地找到了一個(gè)叫做π-鉗（Phe-Cys-Pro-Phe）的特殊序列。接著，研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)終于證明：在含有多個(gè)半胱氨酸（Cys）殘基的肽或蛋白質(zhì)中，只有那些包含了“π-鉗”序列的半胱氨酸（Cys）殘基才能被選擇性的全氟化。當(dāng)”π-鉗”序列的位置在肽的氨基酸序列的C端，N端和中間的任合位置都可以取得非常理想的產(chǎn)率。另外，通過(guò)引入一個(gè)”π-鉗”來(lái)避開(kāi)蛋白質(zhì)的活性中心能夠?qū)θ我馕恢眠M(jìn)行修飾反應(yīng)，所以其應(yīng)用范圍也很廣。

技術(shù)簡(jiǎn)介：

本發(fā)明涉及半胱氨酸改造的抗體和偶聯(lián)物。通過(guò)用具有非交聯(lián)的高度反應(yīng)性半胱氨酸氨基酸取代親代抗體的一種或多種氨基酸改造抗體。還可以用一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸氨基酸改造抗體片段而形成半胱氨酸改造的抗體片段。本公司提供設(shè)計(jì)、制備、篩選和選擇半胱氨酸改造的抗體的方法。

選擇我們：

基于艾柏森蛋白質(zhì)表達(dá)平臺(tái)、噬菌體展示技術(shù)、基因工程平臺(tái)，以及優(yōu)秀的科研團(tuán)隊(duì)，優(yōu)質(zhì)的生物信息學(xué)分析手段，可以根據(jù)您的需求，為您提供半胱氨酸改造抗體的設(shè)計(jì)制備，優(yōu)化，純化等服務(wù)，讓您的實(shí)驗(yàn)更加便捷。

參考文獻(xiàn)：

[1]π-Clamp-mediated cysteine conjugation.Zhang, C.;Welborn, M.; Zhu, T.;Yang, N. J.; Santos, M. S.; Voorhis, T. V.; Pentelute, B. L.*.Nat. Chem. 2016,8, 120–128. doi:10.1038/nchem.2413