蛋白膠切割色譜分析
電泳技術(shù)是一種常用的蛋白質(zhì)分離分析技術(shù),主要包括十二烷基硫酸鈉-聚丙烯電泳(SDS-PAGE)、等電聚焦電泳(IEF)以及兩者的結(jié)合體二維凝膠電泳(2-DE)等。不同的電泳技術(shù)根據(jù)蛋白質(zhì)不同特征參數(shù)如分子質(zhì)量、等電點(diǎn)將蛋白質(zhì)分離開來(lái),電泳結(jié)束后不同分子質(zhì)量或等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)被分離為不同的蛋白條帶。但是由于電泳技術(shù)的分辨率不夠高,一些分子質(zhì)量或等電點(diǎn)很相近的蛋白質(zhì)可能不能被分離開來(lái),而包含在同一個(gè)蛋白條帶中。
色譜技術(shù)是目前較為先進(jìn)的化合物分離純化技術(shù),其以化合物在流動(dòng)相和固定相之間的相互作用為基礎(chǔ),當(dāng)溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí),由于與固定相發(fā)生的作用(吸附、排阻、離子吸引、親和等)的大小和強(qiáng)弱不同,導(dǎo)致其通過(guò)固定相的速度和時(shí)間不同而先后從固定相中流出,從而實(shí)現(xiàn)各組分的分離純化。將電泳后的蛋白質(zhì)膠條再進(jìn)行高分辨率的色譜分析,可以進(jìn)一步分離同一個(gè)膠條中差異微小的蛋白質(zhì),也可對(duì)電泳技術(shù)的分離結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
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