今天帶領(lǐng)大家解讀一篇文章的研究進展，通過這篇文章我們可以了解到對于新冠病毒D614G變異株，研究人員如何快速、精準地篩選到既有免疫原性又具備中和病毒潛力的抗體？

研究摘要

研究表明，SARS-CoV-2入侵人體細胞的途徑，是經(jīng)由其S蛋白與細胞表面的ACE2受體蛋白的結(jié)合完成的，其中D614G突變病毒是近來較為重要的流行突變體。

研究人員通過將S蛋白的ACE2結(jié)合區(qū)段（RBD）免疫羊駝，得到免疫血清后，經(jīng)過細胞表面展示技術(shù)，將抗體表達至細菌表面，然后通過密度梯度離心篩選出免疫活性陽性細菌。通過篩選，研究人員得到了W25及W23兩種nanobody，通過免疫雜交、ELISA等常規(guī)技術(shù)，檢測了其免疫活性。?

那么一個很重要的問題出現(xiàn)了，僅僅具有免疫原性是不夠的，這兩種抗體是否具有在體內(nèi)中和病毒的潛力呢？研究人員使用了NanoTemper的蛋白品控儀Tycho及分子互作檢測儀Monolith來進行檢測。

基于微量熱泳動（MST）技術(shù)，精確測定了W25抗體與RBD之間的結(jié)合力，并進行了與ACE2的競爭結(jié)合實驗。

W25與RBD的結(jié)合力在295pM ± 84pM，具有較強的親和力。

在Monolith上，直接進行競爭結(jié)合實驗，準確的檢測出ACE2競爭W25所需要的濃度，EC50 值為33nM。

所以ACE2與RBD的親和力是遠遠低于W25的。側(cè)面說明W25具有臨床的應(yīng)用價值，可以在體內(nèi)與ACE2競爭結(jié)合病毒，從而清除人體內(nèi)的病毒。

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該成果具有很好的應(yīng)用價值。而在后續(xù)的動物試驗中也驗證了這一結(jié)論。這項成果將為全球抗疫事業(yè)提供更多可能！

Tycho蛋白品控儀

Tycho可在3分鐘內(nèi)，快速地表征蛋白的活性和質(zhì)量，快速確定W25和RBD的結(jié)合。

進行Thermal Shift Assay，W25與RBD結(jié)合后，Ti值發(fā)生偏移，增加了10℃左右，快速確定了W25與RBD有結(jié)合活性。

通過單獨的檢測，得出RBD蛋白和W25蛋白質(zhì)量較好，都具有活性結(jié)構(gòu)。

Monolith和Tycho提供更便捷的解決方案

問：傳統(tǒng)互作方法有什么不足？

答：傳統(tǒng)方法較繁瑣，提取蛋白費時費力，而且只能給出定性的結(jié)論，無法做出諸如該抗體是否具有中和病毒的潛力這種判斷。

問：微量熱泳動（MST）技術(shù)優(yōu)勢？

答：可以精確地測定分子間的相互作用力，而且競爭結(jié)合實驗可以直接準確的比較兩個分子間的相互作用力，從而為研究人員提供了準確判斷的依據(jù)。

問：Monolith的優(yōu)點？

答：

1. 無需固定，不受檢測樣品種類的限制。

2. 檢測速度快，檢測范圍廣（Kd：從pM到mM）。

3. 采用毛細管上樣方式，僅需微量樣品，簡單便捷，即可直接在溶液中測定分子間結(jié)合，最大程度節(jié)省珍貴樣品。

4. 儀器沒有液流系統(tǒng)，不會造成污染，無需定期維護。

問：Tycho的優(yōu)點？

答：時間就是金錢，在本研究中幾分鐘內(nèi)就可以快速判定兩個蛋白的互作。易于操作，無需標記。僅需微量樣品，3分鐘就能為您提供蛋白品質(zhì)的所有信息。

參考文獻：

https://www.nature.com/articles/s41598-021-82833-w