如何選擇合適的親和純化二級抗體？將分多部來講解。本文為第1部分內(nèi)容：選擇合適的類型。

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親和力純化的二級抗體有三種不同的形式，好的選擇取決于預(yù)期的應(yīng)用。從整體IgG、F（ab'）2片段或Fab片段抗體中選擇。整個IgG形式的抗體適用于大多數(shù)免疫檢測程序。

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Jackson艾美捷F（ab’）2和Fab抗體可用于具有特定檢測要求的實驗?？寡迳形催M(jìn)行親和純化。

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圖：IgG的消化（大約MW=160 kDa）產(chǎn)生了許多不同的片段。木瓜蛋白酶消化產(chǎn)生兩個單價Fab片段和一個Fc片段，每個片段約50 kDa。胃蛋白酶消化降解Fc結(jié)構(gòu)域，留下分子量約為110 kDa的二價F（ab’）2片段。

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整個IgG抗體

通過免疫親和層析從抗血清中分離出整個IgG抗體。它們有一個Fc區(qū)和兩個由二硫鍵連接在一起的抗原結(jié)合Fab區(qū)（上圖），因此它們是二價的。據(jù)報道，平均分子量約為160kDa。整個IgG形式的抗體適用于大多數(shù)免疫檢測程序，并且J具成本效益。

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F（ab'）2片段抗體

F（ab’）2片段抗體是通過胃蛋白酶消化整個IgG抗體生成的，以去除大部分Fc區(qū)，同時保留部分完整的鉸鏈區(qū)。F（ab’）2片段有兩個通過二硫鍵連接在一起的抗原結(jié)合Fab區(qū)域，因此它們是二價的。平均分子量約為110kDa。它們用于特定的應(yīng)用，例如避免活細(xì)胞的次級抗體與Fc受體或蛋白質(zhì)A或蛋白質(zhì)G結(jié)合。

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如果一級抗體是完整的IgG抗體，則也可能發(fā)生與Fc受體的結(jié)合，無論二級抗體的形式如何，都會產(chǎn)生背景。為了阻止整個IgG一級和二級抗體與Fc受體結(jié)合，在含有5%標(biāo)記二級抗體宿主正常血清的緩沖液中培養(yǎng)細(xì)胞。

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為了防止活細(xì)胞上Fc受體的覆蓋、內(nèi)吞和再生，在4°C下，在含有5%正常血清的緩沖液中培養(yǎng)，并添加疊氮化鈉以抑制代謝。關(guān)于避免背景的更多信息。

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Jackson艾美捷Fab片段二級抗體

Fab片段抗體是通過木瓜蛋白酶消化整個IgG抗體產(chǎn)生的，以去除整個Fc部分，包括鉸鏈區(qū)域（上圖）。這些抗體是單價的，只含有一個抗原結(jié)合位點。Fab片段的分子量約為50kDa。它們可用于阻斷細(xì)胞、組織或其他表面上的內(nèi)源性免疫球蛋白，并在使用來自同一物種的初級抗體的多重標(biāo)記實驗中阻斷暴露的免疫球蛋白。

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Jackson艾美捷FabuLight抗體

FabuLight?抗體是特異于IgG或IgM一級抗體Fc區(qū)的Fab片段二級抗體。它們能夠在與細(xì)胞或組織孵育之前標(biāo)記一級抗體，而不會損害一級抗體的活性部位。它們也可用于標(biāo)記細(xì)胞表面免疫球蛋白，而無需交聯(lián)和激活B細(xì)胞。

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抗血清

抗血清通常用于免疫沉淀分析，如免疫擴(kuò)散和免疫電泳，但不適用于包衣ELISA板或其他需要親和純化抗體的應(yīng)用。建議使用抗全I(xiàn)gG分子的抗血清（抗IgG（H+L））將PAP橋接至一級抗體。

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Jackson ImmunoResearch專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)于大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。