環(huán)氧合酶（COX，又稱前列腺素H合酶或PGHS）是一種具有COX和過(guò)氧化物酶活性的雙功能酶。環(huán)氧合酶組分將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為氫過(guò)氧化物內(nèi)過(guò)氧化物（PGG2），過(guò)氧化物酶組分將內(nèi)過(guò)氧化物還原為相應(yīng)的醇（PGH2），即PGs、血栓素和前列環(huán)素的前體。

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現(xiàn)在已經(jīng)確定COX有兩種不同的亞型。COX-1在多種細(xì)胞類型中組成性表達(dá)，并參與正常細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。多種刺激物，如佛波酯、脂多糖和細(xì)胞因子，導(dǎo)致第二種COX亞型COX的誘導(dǎo)表達(dá).在急性炎癥條件下，COX-2負(fù)責(zé)PGs的生物合成。這種誘導(dǎo)型COX-2被認(rèn)為是非甾體抗炎藥抗炎活性的靶酶。

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艾美捷COX熒光抑制劑篩選試驗(yàn)為篩選綿羊COX-1和人類重組COX-2的同工酶特異性抑制劑提供了一種方便的基于熒光的方法。該分析利用了柯薩病毒的過(guò)氧化物酶成分。PGG2和ADHP（10-乙?；?3,7-二羥基苯惡嗪）之間的反應(yīng)產(chǎn)生高熒光化合物resorufin。

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使用板塊上的井沒(méi)有特定的模式。然而，有需要將三個(gè)孔指定為非酶或背景孔。這些孔的熒光須從COX孔中測(cè)得的熒光中減去。建議對(duì)每個(gè)COX樣品進(jìn)行一式三份的分析。

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艾美捷COX熒光抑制劑篩選試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

?所有孔中的分析最終體積為200μl。

?在分析中使用稀釋的分析緩沖液。

?所有試劑（酶除外）須平衡至室溫在開始化驗(yàn)之前。

?無(wú)需一次性使用板上的所有孔。

?不必同時(shí)使用這兩種酶?？梢允褂肅OX-1或COX-2進(jìn)行研究。

?建議化驗(yàn)樣品一式三份，但用戶可自行決定。

?可對(duì)30個(gè)抑制劑樣品進(jìn)行一式三份或四十六份的分析。

?在室溫下進(jìn)行分析。

?用530-540 nm的激發(fā)波長(zhǎng)和585-595 nm的發(fā)射波長(zhǎng)監(jiān)測(cè)熒光。

?在靠近熒光計(jì)的位置啟動(dòng)花生四烯酸反應(yīng)，因?yàn)橛斜匾诜磻?yīng)開始兩分鐘后讀取平板。