疏水性多肽如何使用DMSO溶解
二甲基亞砜(DMSO)是一個含硫的有機(jī)化合物,常溫狀態(tài)下為無色無味的透明液體。DMSO用作冷凍保護(hù)劑常常應(yīng)用在細(xì)胞庫。在細(xì)胞冷凍的時候,DMSO可避免胞內(nèi)/胞外產(chǎn)生晶體,其使用濃度為10%。DMSO一般可與鹽或血清蛋白相結(jié)合。
DMSO能夠很輕易地溶解疏水性多肽。但DMSO可提升細(xì)胞的滲透性,若多肽在DMSO中溶解便會對細(xì)胞造成毒性反應(yīng)。高濃度的DMSO千萬不能使用在細(xì)胞培養(yǎng)中。濃度值為5%的DMSO就可以溶解細(xì)胞膜。大部分細(xì)胞株能夠忍受0.5%DMSO,少量能夠忍受1%的濃度,且不體現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性??墒窃?xì)胞培養(yǎng)對其非常敏感。那么如果要用原代細(xì)胞做劑量/反應(yīng)曲線(可行性),其濃度應(yīng)小于0.1%。
對于一些疏水性很高的多肽,可試著把它溶解在一定量的DMSO(30-50ul,100%)中,接著一滴一滴輕輕地把它加到不停攪拌的溶液如PBS或其它想要的緩沖液中,直到濃度滿意。假如滴入的時候,肽溶液逐漸變混濁,證明已經(jīng)接近溶解上限。此外,超聲波有利于溶解多肽,不過在運(yùn)用超聲處理應(yīng)注意超聲波會造成溶液發(fā)燙進(jìn)而造成多肽降解,因此一定要在冰上進(jìn)行操作。
下面是一部分經(jīng)驗(yàn)分享:
1、對絕大多數(shù)的細(xì)胞而言,濃度值為0.1%DMSO十分安全。
2、普遍應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞的DMSO終濃度為0.5%,不會造成細(xì)胞毒性。
3、雖然對一部分細(xì)胞來講,1%DMSO也不會造成細(xì)胞毒性,但更推薦0.5%。
4、也有5%DMSO出色地用于某一些細(xì)胞的例子。
5、一直保持終濃度在0.5%,但存放的時候可以200倍高濃度溶解于100%的DMSO中。