不懂？但你得知道—體內(nèi)基因調(diào)控載體怎么選
不懂？但你得知道—體內(nèi)基因調(diào)控載體怎么選
?????? 腺病毒載體（adenovirus，Ad）不僅適用于細(xì)胞實驗，還可以用于動物實驗，而相比之下，大多時候腺相關(guān)病毒載體（Adeno-associated virus，AAV）更適合動物實驗。往期，我們介紹了腺病毒和腺相關(guān)病毒及其包裝和感染細(xì)胞的過程。本期通過二者的特點，小編為大家梳理一下在體內(nèi)做基因調(diào)控可以從哪些方面考慮選擇合適的病毒載體。
1、? 實驗周期：動物實驗的建模周期是影響載體選擇的首要因素。對于實驗周期較長或慢性疾病的建模，這些實驗周期一般需要2~6個月甚至更長時間，通常要用到AAV載體，盡可能減少實驗動物損傷的同時維持長期調(diào)控作用；對于周期在1~4周的模型，Ad和AAV都可以作為考慮，但AAV最好用于4周左右的模型；對于3天~7天的急性實驗?zāi)Ｐ停?/strong>Ad更適合。
2、? 表達(dá)時間：病毒的表達(dá)時間和實驗周期相互關(guān)聯(lián)。Ad感染后1~2天開始表達(dá)，3~4天在體內(nèi)達(dá)到表達(dá)高峰，可以維持1~3周的表達(dá)，因此可用于急性模型和一個月內(nèi)的實驗周期，為期一個月的實驗可以在首次注射后兩周再補打一次病毒，保證實驗期間最佳表達(dá)效果。AAV表達(dá)周期較長，通常感染2周后開始表達(dá)，3~4周達(dá)到表達(dá)高峰，可維持長達(dá)3~6個月的表達(dá)，適用于慢性模型；實驗周期超過2個月的，通常建議1個半月或2個月補打一次。
3、? 組織/細(xì)胞特異性： 體內(nèi)實驗我們可能需要感染特定組織器官或細(xì)胞，除了選擇合適的注射方式外，結(jié)合特異性血清型和啟動子能更好的達(dá)到實驗?zāi)康摹AV有12種血清型，可以識別相應(yīng)的細(xì)胞表面受體，從而感染特定的組織細(xì)胞（圖1）。為了使感染特異性更強，科研人員對野生型血清型進(jìn)行改造篩選，由此衍生出更多更具靶向性的AAV血清型（圖1）。
圖1? AAV對不同組織的特異性血清型
帶上特異性啟動子可以使外源序列在目的細(xì)胞或組織中表達(dá)（表1）。而Ad的感染表達(dá)特異性依賴特異性啟動子?？偟膩碚f，AAV可靶向組織細(xì)胞的選擇性更多。
表1??組織/細(xì)胞特異性啟動子
4、? 載體容量：Ad可以插入5kb左右的外源序列；AAV的容量相對小些，最大可到3kb左右。若超過載體容量會導(dǎo)致滴度下降甚至出毒困難，所以外源基因大小也是病毒選擇需要考慮的因素。
5、? 安全性：病毒導(dǎo)致實驗動物的免疫反應(yīng)會引起實驗結(jié)果偏差，導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。AAV目前仍未發(fā)現(xiàn)與任何疾病的發(fā)生有關(guān)，免疫原性極低，對實驗動物的狀態(tài)影響較小。而Ad的免疫原性相對高，可能會引起免疫炎癥反應(yīng)。
?以上5個方面內(nèi)容需要全面綜合考量，才可以選定符合實驗設(shè)計的病毒載體，必要時可以調(diào)整實驗策略或在并特性間做取舍，如果有拿捏不準(zhǔn)的地方，歡迎隨時與我們聯(lián)系溝通。漢恒生物專注病毒包裝十余年，有豐富的實踐經(jīng)驗，如有病毒需求或技術(shù)問題歡迎咨詢！
