核糖凝膠電泳技術(shù)-3（科學(xué)推論）
從 DNA 凝膠中得出科學(xué)推論
分子生物學(xué)家通常使用帶有 DNA 條帶的瓊脂糖凝膠來確定某些事物。 以下是科學(xué)家從可視化電泳中獲得的一些最常見的見解：
DNA 混合物中的 DNA 片段數(shù)：
當(dāng)使用瓊脂糖凝膠對 DNA 進(jìn)行電泳時(shí)，分子會根據(jù)大小進(jìn)行分類。 因此，如果樣本中有 X 個(gè)不同的片段，我們就會在凝膠中看到 X 個(gè)條帶。
因此，可以通過在凝膠中運(yùn)行一小部分 DNA 來推斷 DNA 樣本中的 DNA 片段數(shù)量。
圖 1. 第一個(gè)泳道（從左起）有一個(gè) DNA 片段，而第二個(gè)泳道有兩個(gè)片段。
在許多情況下，此信息可能很重要； 例如，當(dāng)實(shí)驗(yàn)者正在評估質(zhì)粒是否已被消化時(shí)。
未消化的質(zhì)粒在凝膠中出現(xiàn)三個(gè)條帶，而單位點(diǎn)消化（線性化）的質(zhì)粒將僅顯示一個(gè)條帶。
此外，限制性核酸內(nèi)切酶是僅在一個(gè)位點(diǎn)還是多個(gè)位點(diǎn)切割質(zhì)粒，可通過觀察消化后的質(zhì)粒樣品電泳時(shí)出現(xiàn)在凝膠上的條帶數(shù)量來推斷。
DNA 樣本中片段的大?。?/strong>
如下圖 2b 所示，通過在瓊脂糖凝膠中沿著 DNA ladder 運(yùn)行 DNA 樣本，可以估計(jì)單個(gè)片段（顯示為條帶）的大小。
DNA ladder 是多個(gè)不同分子量的 DNA 片段的混合物。 大小是已知的。 當(dāng) ladder 在瓊脂糖凝膠上運(yùn)行時(shí)，片段會根據(jù)它們的大小進(jìn)行分類。
分開的帶看起來像梯子的梯級，這就是 DNA ladder?得名的地方。
圖2b：瓊脂糖凝膠中沿著 DNA ladder 運(yùn)行 DNA 樣本
圖 3. 第二條泳道（從左起）是 DNA ?ladder。 基于它，可以估計(jì)在泳道 1、3 和 4（左起）上運(yùn)行的片段的大小。
確認(rèn) DNA 片段的精確分子量對于許多實(shí)驗(yàn)程序至關(guān)重要，例如分子克隆。
在克隆感興趣的 DNA 片段之前，有必要通過在凝膠中運(yùn)行樣品來確認(rèn)其大小。
聚合酶鏈反應(yīng) (PCR) 產(chǎn)物的評估也使用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行。
估計(jì)樣品中 DNA 的濃度：
如果參考 DNA 樣本（例如，DNA ladder）的濃度已知，則未知樣本的濃度可以通過將其在凝膠上的條帶強(qiáng)度與已知濃度的樣本進(jìn)行比較來估計(jì)。
圖 4. 從左起第一條泳道：具有已知 DNA 濃度條帶的 DNA 階梯。 左數(shù)第二和第三泳道：未知濃度的 DNA 條帶。 通過使用密度測定軟件將這些條帶的熒光強(qiáng)度與階梯條帶的熒光強(qiáng)度進(jìn)行比較，可以計(jì)算出這些樣品的濃度。
