2種常用的Mg2+離子探針
1.Calmagite——鈣鎂絡(luò)合指示劑
鎂離子和Calmagite在堿性溶液中形成桃紅色復(fù)合物,其在570nm處有吸收峰,則570nm處的吸光度變化與鎂離子含量成正比。
圖1.Calmagite化學(xué)結(jié)構(gòu)
2.Mag-Fura-2——細(xì)胞內(nèi)鎂熒光探針
Mag-fura-2 四鉀鹽是一種細(xì)胞內(nèi)鎂離子特異性熒光探針,屬于紫外光激發(fā)的比率式探針。水溶性的鹽形式適用于通過(guò)顯微注射、從膜片移液管注入。吸收波長(zhǎng)(λmax)369±3 nm(水),熒光波長(zhǎng)(λmax)508±4 nm(水)。
圖2.Mrs2 KD對(duì)細(xì)胞內(nèi)Mg2 +穩(wěn)態(tài)的影響:同時(shí)加載Mag-Fura-2(a)和MitoFluor Red(b)的HeLa細(xì)胞的圖像。(C–F)圖a和b中框框區(qū)域的放大視圖(c,d)Mag-Fura-2在圖a和b中顯示的同一細(xì)胞中的定位,在(c)和(d)通過(guò)洋地黃皂苷透化細(xì)胞膜之前和之后。(e) 洋地黃皂苷透化細(xì)胞膜后米托氟紅的定位。(f) 顯示了合并的圖像。(g)對(duì)照線粒體Mg2+水平和Mrs2 KD HeLa細(xì)胞。比較在340nm處激發(fā)的Mag-Fura-2熒光與在380nm處激發(fā)的比率,表明線粒體Mg2 +水平,顯示Mrs2 KD細(xì)胞減少(對(duì)照n = 148,來(lái)自5個(gè)實(shí)驗(yàn)的Mrs2 KD細(xì)胞n = 105)。(h-j)通常加載Mag-Fura-2的HeLa細(xì)胞的圖像。(h)用emGFP標(biāo)記的Mrs2 KD細(xì)胞的熒光圖像。(i)裝有Mag-Fura-2(綠色)的對(duì)照和emGFP標(biāo)記(紅色)Mrs2 KD細(xì)胞的合并熒光圖像。(j) 加載Mag-Fura-2的HeLa細(xì)胞在激發(fā)340和380nm時(shí)的熒光發(fā)射比圖像。偽彩色顯示了在340 nm至380 nm激發(fā)的Mag-Fura-2信號(hào)的發(fā)射比。(k)對(duì)照和Mrs2 KD細(xì)胞中的胞質(zhì)Mg2+水平。在Mrs2 KD細(xì)胞中,胞質(zhì)Mg2+水平高于對(duì)照細(xì)胞(對(duì)照為n = 304,來(lái)自5個(gè)的n = 384 Mrs2 KD細(xì)胞)。