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一圖讀懂細胞轉(zhuǎn)染那些事

2023-07-19 09:17 作者:bili_11941002676  | 我要投稿

細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。定義 隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。

下文中將從多個維度,介紹細胞轉(zhuǎn)染的各類小知識。

一、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達的蛋?正確折疊并進行復(fù)雜修飾,表達的蛋?更接近真實自然狀態(tài),便于模擬真實細胞內(nèi)環(huán)境,進行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞,表達?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式:瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(構(gòu)建穩(wěn)定細胞系)(見P1圖示)

瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有如下特點:(見P2圖示)

二、轉(zhuǎn)染方法

細胞轉(zhuǎn)染方法可分為化學法,物理法,生物法,也可把化學法、物理法稱為非病毒載體,生物法稱為病毒載體。不同的轉(zhuǎn)染方法可分別用于瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,不過效率與效果不同(見下方圖示)

三、病毒載體也是細胞轉(zhuǎn)染的產(chǎn)物

病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染是目前在細胞治療等應(yīng)用中有前景的方向,化學法,物理法在實施過程中,對細胞均有一定程度的損害,所以用于細胞治療藥物的研究受到限制。病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染也叫侵染。人類有漫長的和病毒斗爭的歷史,對病毒研究較為清晰,改造后病毒轉(zhuǎn)染結(jié)果相對可以控制。目前使用病毒載體的藥物已經(jīng)有多個上市,比如SMA基因治療藥物采用AAV病毒遞送,一針200萬美元,已上市3個CART用慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒(HIV的變種)來轉(zhuǎn)入基因,已上市的埃博拉病毒疫苗用AD26病毒載體等。

病毒載體的制備是目前CRO服務(wù)中的重要內(nèi)容,病毒載體的生產(chǎn)(如圖)先用大腸桿菌等生產(chǎn)出質(zhì)粒,然后把多種質(zhì)粒(通常是三質(zhì)?;蛩馁|(zhì)粒系統(tǒng))通過轉(zhuǎn)染進入細胞中,表達出病毒載體的外殼蛋白、功能蛋白等,然后組裝成含目的基因的病毒載體,通過純化工藝獲得工具病毒,工具病毒感染細胞,腺病毒可于轉(zhuǎn)染成功2小時后即可檢測到表達產(chǎn)物,逆轉(zhuǎn)錄病毒則需要經(jīng)過多輪賽選,選擇基因整合進細胞基因組的穩(wěn)定細胞株,用于后續(xù)研究。


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