1、什么是FRET檢測法
可以利用熒光共振能量傳遞(Fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET)原理進(jìn)行檢測，在合成的蛋白酶底物多肽兩端分別標(biāo)記熒光發(fā)光基團(tuán)EDNAS和熒光猝滅基團(tuán)DABCYL。EDNAS在355nm光波激發(fā)下能夠發(fā)出最大發(fā)光波長為490nm的熒光，而猝滅基團(tuán)DABCYL能夠吸收熒光，其最大吸收波長也是490nm。當(dāng)?shù)鞍酌傅孜锿暾麜r，發(fā)光基團(tuán)發(fā)出的熒光被猝滅基團(tuán)吸收，整個反應(yīng)體系不發(fā)光；當(dāng)?shù)鞍酌傅孜锉磺懈詈?，發(fā)光基團(tuán)離開猝滅基團(tuán)，猝滅效應(yīng)降低甚至消失，反應(yīng)體系發(fā)出熒光。

2、常用的熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)組合有那些？
DABCYL/ EDANS，DABCYL/6-FAM，TAMRA/6-FAM，Abz/Tyr(3-NO2), Mca/Dnp

3、熒光修飾在序列中，在C端修飾時的方式有那些？

通常熒光染料化合物帶有羧酸或者NHS活化酯，所以與多肽接合時需要多肽有氨基官能團(tuán)，所以通過在序列中可以修飾在Lys側(cè)連氨基上，在C端時需要增加Lys或通過乙二胺（ED：NH2CH2CH2NH2）連進(jìn)行連接。如Lys（Biotin），ED-Biotin，EDDnp等。