在 Amplifluor? 測定中，PCR 探針與目標(biāo)序列雜交，標(biāo)記的探針改變其構(gòu)象以發(fā)出熒光。 它包含三個(gè)組件：Z 序列、Z 引物和 UniPrimer。

Z序列：用作模板的18個(gè)核苷酸的序列。

Z 引物：結(jié)合 Z 序列 5' 端的序列。

UniPrimer：以環(huán)狀形式存在的序列，其中熒光報(bào)告基因和猝滅劑非常接近。

圖 1. Amplifluor? 檢測由 Z 引物和 Z 序列以及包含淬滅劑和報(bào)告基因的 UniPrimer 組成。

Amplifluor? 檢測如何工作？

在 Amplifluor? 測定中，Z 序列與 Z 引物的 5' 端結(jié)合。

Z 引物在第一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中與目標(biāo)序列雜交并延伸。

這個(gè) Z 序列是 UniPrimer 的 3'端。 在第二個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中，該 Z 序列與第一個(gè)序列的產(chǎn)物雜交。 它用作 UniPrimer 的模板，UniPrimer 包含與 Z 序列互補(bǔ)的序列。

在第三個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中，擴(kuò)展的 UniPrimer 充當(dāng)下一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)的模板鏈。

在第四個(gè)循環(huán)中，UniPrimer 的打開導(dǎo)致淬滅劑和熒光報(bào)告分子分離，然后報(bào)告分子發(fā)出熒光。

此處，熒光信號與擴(kuò)增產(chǎn)物的量成正比。

圖 2. 顯示了 Ampliflour? 分析在每個(gè)循環(huán)中的過程。

該探針的優(yōu)點(diǎn)是對目標(biāo)序列具有特異性。 缺點(diǎn)是寡核苷酸序列的設(shè)計(jì)復(fù)雜。