利用膠原酶灌注法分離小鼠胰島 ，?具體操作步驟如下：

1)腹腔注射三溴乙醇麻醉小鼠。

2)腹部消毒, 打開腹部暴露膽管和胰管。

3)胰腺原位灌注3 mL預(yù)冷的膠原酶XI, 使胰島充盈。

4)迅速摘取胰腺放入裝有5 mL HBSS (Hanks Balanced Salt Solutions, HBSS) 平衡液的50 mL離心管中, 37℃水浴19?min。

5)孵育期間手動(dòng)搖勻離心管2-3次, 直至看見均質(zhì)化的胰腺懸浮液。

6)將離心管置于冰上, 加入25 mL 含有CaCl2的HBSS液終止消化。4℃, 290 g離心30 s, 棄上清。

7)再次加入含CaCl2的HBSS液清洗沉淀一次, 4℃, 290 g離心30 s, 棄上清留沉淀。

8)加入15 mL 含CaCl2的HBSS液, 重懸。

9)用70 μm細(xì)胞篩將重懸液過濾, 倒轉(zhuǎn)細(xì)胞篩, 細(xì)胞篩下方放置培養(yǎng)皿。

10)用RPMI 1640培養(yǎng)液沖洗倒置的細(xì)胞篩, 過濾后殘留在細(xì)胞篩的胰島被沖入培養(yǎng)皿中, 37℃培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)。

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