最近，THZ1 已被鑒定為干擾轉(zhuǎn)錄機(jī)制的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 7 (CDK7) 抑制劑。盡管它在各種癌癥模型中顯然有效，但從未報(bào)道過 RCC 的數(shù)據(jù)。在這項(xiàng)研究中，我們證明了 CDK7 表達(dá)對腫瘤進(jìn)展和生存的影響。我們發(fā)現(xiàn) THZ1 在 RCC 細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯，從而降低細(xì)胞活力。此外，THZ1 在體外與 temsirolimus 有協(xié)同作用，可能是通過抑制自噬。此外，與單獨(dú)使用 THZ1 或西羅莫司相比，聯(lián)合治療進(jìn)一步抑制了體內(nèi)腫瘤的生長。

THZ1（Abmole，M5228，純度98.33%）是一種是共價(jià)的CDK7抑制劑，在本研究中用于處理細(xì)胞，貫穿全程試驗(yàn)過程。

Fig. 2. THZ1 induces apoptosis in human renal cell carcinoma (RCC) cells

為了評(píng)估 THZ1 在 RCC 細(xì)胞中的細(xì)胞毒作用，進(jìn)行了 MTT 測定以估計(jì)用各種濃度的THZ1 處理 24 小時(shí)和 48 小時(shí)后 786-O、Caki-2、ACHN 和 A 498 細(xì)胞的活力（圖 2A 和 B）。 細(xì)胞活力以劑量依賴性方式降低。隨著治療持續(xù)時(shí)間的增加，活力進(jìn)一步降低。 對于 786-O 細(xì)胞，24 小時(shí)后未達(dá)到半數(shù)最大抑制濃度 (IC50)，48 小時(shí)后約為 150 nM。786-O 細(xì)胞所需的劑量高于 Caki-2 細(xì)胞。這些結(jié)果表明THZ1對RCC細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用。
為了評(píng)估THZ1 對 RCC 細(xì)胞凋亡的影響，用THZ1處理24小時(shí)后在786-O細(xì)胞中用膜聯(lián)蛋白 V 染色進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)（圖 2C）。 隨著 THZ1 的濃度增加到 200 nM，凋亡細(xì)胞的比例從 9.3% 增加到 39.5%。在 Caki-2 細(xì)胞中觀察到類似的結(jié)果（圖 2D）。

Fig. 3. THZ1 inhibits the proliferation of RCC cells by inducing G1 cell cycle arrest

為了評(píng)估THZ1對細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的影響，進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)來估計(jì)細(xì)胞周期各個(gè)階段的細(xì)胞比例。隨著劑量的增加，THZ1處理導(dǎo)致786-O和Caki-2細(xì)胞中G0/G1期的細(xì)胞比例增加（圖 3A 和 B）。此外，進(jìn)行了免疫印跡以評(píng)估細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的變化（圖 3C 和 D）。 一致地，結(jié)果顯示細(xì)胞周期蛋白 D1、細(xì)胞周期蛋白 D3、CDK4、CDK6、Cdc2、PCNA 和 cdc25c 的劑量依賴性減少，以及 p27 的劑量依賴性增加 為了評(píng)估細(xì)胞周期停滯的結(jié)果，進(jìn)行了BrdU測定以估計(jì)細(xì)胞增殖活性（圖 3E）。在 THZ1 處理后，兩種細(xì)胞的增殖能力均下降?？偟膩碚f，這些結(jié)果表明 THZ1 通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期來減少 RCC 細(xì)胞的生長。

Fig. 4. The synergistic effect of THZ1 and temsirolimus on human RCC cells

我們在將固定劑量的 THZ1 (200 nM) 和不同劑量的 temsirolimus (0-50 μM ) (圖 4A 和 B)。在兩種細(xì)胞系中，與單獨(dú)用相同濃度的西羅莫司處理的組中的細(xì)胞活力相比，THZ1 顯著降低了細(xì)胞活力。結(jié)果表明THZ1與temsirolimus聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用。

鳴謝：Po-Ming Chow, et al. Cancer Lett. 2020 Feb 28;471:27-37.