(一)準備工作

1.在開始工作以前，要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。

2.將所有必需的物品置于安全柜內(nèi)，以盡可能減少雙臂進出前面開口的次數(shù)。物品放置要注意以下幾點：

①II級生物安全柜臺面前面和后面的進氣格柵不能被物品阻擋。

②所有物品應盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺邊緣的位置，并使其在操作中不會阻擋后部格柵。

③可產(chǎn)生氣溶膠的設備(如：混勻器、離心機等)應靠近安全柜的后部放置。有生物危害性的廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子等體積較大的物品，應該放在安全柜內(nèi)的某一側。

④潔凈的物品應放置在距離產(chǎn)生氣溶膠器皿至少15 cm外，降低交叉污染的可能性。

⑤容易受紫外線損傷的實驗樣本可以在紫外線殺菌后的實驗之前放入。

⑥不要在工作區(qū)內(nèi)排放過多的物品。

3.關閉操作前窗，打開生物安全柜的紫外燈，對生物安全柜工作臺面，側壁表面以及后壁內(nèi)側進行殺菌處理。

4.稍微打開操作前窗，讓生物安全柜工作區(qū)排氣幾分鐘之后再開始工作。

(二)操作注意事項

1.在使用生物安全柜時應穿著個體防護服并戴手套防止被污染。在進行一級和二級生物安全水平的操作時，可穿著普通實驗服。手套應套在實驗服袖口外面。有些操作可能還需要戴口罩和護目鏡。

2.在生物安全柜內(nèi)，避免使用酒精燈等明火滅菌器。使用明火會對氣流產(chǎn)生影響，并且在處理揮發(fā)性物品和易燃物品時，也易造成危險。在對接種環(huán)進行滅菌時，可以使用紅外線電加熱器(見圖1),或者干脆使用一次性塑料接種環(huán)。

3.手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約1min,以便安全柜調(diào)整完畢并且讓里面的空氣“掃過”手和雙臂的表面以后，才可以開始對物品進行處理。

4.工作時，盡量減少手臂的移動，移動時要緩慢，防止干擾柜內(nèi)氣流。在移動雙臂進出安全柜時，需要小心維持前面開口處氣流的完整性，雙臂應該與工作區(qū)開口垂直地緩慢進出前面的開口。

5.在工作臺面上的實驗操作應該按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進行，所有操作在工作臺面的中后部進行。

6.工作時，耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤放在安全柜內(nèi)不能拿出安全柜，否則在使用這些物品時雙臂就必須頻繁進出安全柜，這樣會干擾安全柜空氣屏障的完整性，從而影響對人員和物品的防護。

7.一旦實驗過程中產(chǎn)生溢灑物，用消毒紙巾置于其表面吸附清理。

8.盡量使安全柜處于持續(xù)工作狀態(tài)，并對所有物品進行表面消毒處理，提供最大程度的人員保護。從安全柜內(nèi)部拿取可能產(chǎn)生污染的物品時，一定要進行表面消毒處理。

(三)使用完畢后的處理

1.系緊用過的生物廢物袋。

2.對安全柜內(nèi)壁、后壁、工作臺面和前窗內(nèi)側進行清潔和消毒處理。

3.由于剩余的培養(yǎng)基可能會使微生物生長繁殖，因此在實驗結束時，包括儀器設備在內(nèi)的所有物品都應清除表面污染，并移出安全柜。

4.從安全柜內(nèi)移出手臂之前，一定要進行表面消毒處理，然后垂直于工作區(qū)開口緩慢地移出。

6.在每次使用后，要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。工作臺面和內(nèi)壁要用消毒劑進行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里的任何微生物。在每天實驗結束時，應擦拭生物安全柜的工作臺面、四周以及玻璃的內(nèi)外側等部位來清除表面的污染。在對目標生物體有效時，可以采用漂白劑溶液或70%酒精來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進行擦拭。

7.關閉前操作窗口并開啟紫外燈。

(四)生物安全柜內(nèi)溢灑的處理

處理溢灑物時不要將頭伸入安全柜內(nèi)，也不要將臉直接面對前操作口，而應處于前視面板的后方。選擇消毒滅菌劑時需要考慮其對生物安全柜的腐蝕性。

如果溢灑的量不足1 ml時，可直接用消毒滅菌劑浸濕的紙巾(或其他材料)擦拭。

如果溢灑量大或容器破損，建議按如下操作：使生物安全柜保持開啟狀態(tài)；在溢灑物上覆蓋浸有消毒滅菌劑的吸收材料，作用一定時間以發(fā)揮消毒滅菌作用，必要時，用消毒滅菌劑浸泡工作表面以及排水溝和接液槽；在安全柜內(nèi)對所戴手套消毒滅菌后，脫下手套；如果防護服已被污染，脫掉所污染的防護服后，用適當?shù)南緶缇鷦┣逑幢┞恫课?；穿好適當?shù)膫€體防護裝備，如雙層手套、防護服、護目鏡和呼吸保護裝置等；小心將吸收了溢灑物的紙巾(或其他吸收材料)連同溢灑物收集到專用的收集袋或容器中，并反復用新的紙巾(或其他吸收材料)將剩余物質吸凈；破碎的玻璃或其他銳器要用鑷子或鉗子處理；用消毒滅菌劑擦拭或噴灑安全柜內(nèi)壁、工作表面以及前視窗的內(nèi)側；作用一定時間后，用潔凈水擦干凈消毒滅菌劑；如果需要浸泡接液槽，在清理接液槽前要先報告主管人員；可能需要用其他方式消毒滅菌后再進行清理。如果溢灑物流入生物安全柜內(nèi)部，需要評估后采取適用的措施。

(五)定期維護

1.每三個月更換一次預過濾器。

2.每年更換一次紫外燈。

3.有下列情況之一時，應對生物安全柜進行現(xiàn)場檢測：生物安全實驗室竣工后，投入使用前，生物安全柜已安裝完畢；生物安全柜被移動位置后；對生物安全柜進行檢修后；生物安全柜更換高效過濾器后；生物安全柜一年一度的常規(guī)檢測。現(xiàn)場檢測應由有資質的專業(yè)人員按照生產(chǎn)商的說明對每一臺生物安全柜的運行性能以及完整性進行評估，以檢查其是否符合國家標準要求。安全柜防護效果的評估應該包括對安全柜的完整性、HEPA過濾器的泄漏、垂直氣流的速度、工作窗口氣流流向和平均風速、負壓/換氣次數(shù)、氣流的煙霧模式以及警報和互鎖系統(tǒng)進行測試。還可以選擇進行漏電、光照度、紫外強度、噪音水平以及振動性測試。在進行這些測試時，檢測人員要經(jīng)過專門的培訓，采用專門的技術和儀器設備。強烈建議由有資質的專業(yè)人員來進行測試。

每周采用空氣落菌數(shù)相似的方法進行無菌檢查。

生物安全柜在移動以及更換過濾器之前，必須清除污染。最常用的方法是采用甲醛熏蒸,應該由有資質的專業(yè)人員來清除污染。