HT-Blot Western Blot孵育器

免疫印跡實驗（Western Blot）是目前實驗室進(jìn)行免疫檢測最常用的實驗方法之一。與ELISA實驗方法相比，Western Blot實驗流程更繁瑣，工作量更大，如果對多個樣品同時進(jìn)行檢測，通常是將轉(zhuǎn)印之后的膜一條條剪下，分別放入對應(yīng)的一抗小孵育盒子或者雜交袋；漂洗之后再分別加入對應(yīng)的二抗分別孵育；實驗過程中需要在每張膜條上做標(biāo)記，其工作量相當(dāng)大，一旦標(biāo)記錯誤或記錄錯誤都會造成很大麻煩。

本孵育器采用物理分隔的方式將膜分格成小室，對應(yīng)待孵育抗體通過注液孔直接注入小室孵育，不需要額外的孵育盒或者雜交袋，更免去剪膜和反復(fù)做記號的麻煩，可整張膜進(jìn)行Western Blot實驗，記錄實驗結(jié)果更完整和方便。

操作方法：

n???一抗孵育：

1、打開孵育器，將孵育器的上蓋取下，底板放平，適當(dāng)調(diào)整膠墊位置處于中心位置，并用封閉液將膠墊表面潤濕；

2、將封閉好的整張膜（膜尺寸應(yīng)該小于膠墊尺寸），輕輕平鋪在膠墊上面，從一面輕輕趕走膠墊與膜之間的氣泡；

3、將孵育器的上蓋輕輕壓在膜上，將長方形液槽一面與膜接觸，膜上彩色Marker條帶置于對應(yīng)槽正中位置，均勻擰緊四角緊固螺絲（緊固到液孔槽加入液體不流出或者流串到其他液孔槽為宜），液孔槽與膜之間形成空腔液槽小室；

4、將對應(yīng)抗體工作液分別通過對應(yīng)液槽背面任意一端的注液孔輕輕注入液槽小室，抗體工作液一般的注入量不超過液槽小室總?cè)莘e的3/4；

5、抗體工作液注入之后可將整個孵育器平放在搖床震蕩孵育（振幅不可過強），也可以平放在合適的溫度靜置孵育；

6.孵育完成后，將孵育器向任一注液孔側(cè)傾斜，將抗體工作液倒掉，吸盡孔緣殘留抗體工作液；

7.從另一側(cè)注液孔分別加入洗滌液，盡可能加滿（注意不要串孔），浸泡3-5分鐘按照步驟6傾倒抗體工作液的方法傾倒洗滌液；

8.重復(fù)步驟7 ，3-5次；

n???二抗孵育

如果整張膜所使用的二抗相同，此時可將孵育器拆開取出整張膜在孵育盒中進(jìn)行二抗孵育。

9.傾倒掉洗滌液，并吸干孔緣殘液，通過注液孔分別注入對應(yīng)二抗，重復(fù)步驟5-8。

n???底物顯色

10.松開緊固螺絲，取下上蓋，拆開孵育器，取下整張膜放在洗滌液里洗滌3次；

11.膜平放在干凈顯色板上，加入底物曝光或通過化學(xué)發(fā)光儀拍照記錄圖片。? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??

?圖1.??? 實驗外觀圖? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??圖2. 凝膠轉(zhuǎn)膜后染色與實驗后膜(膜道壓痕)

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圖3.Western Blot 實驗效果圖