多規(guī)格不完全弗氏佐劑(IFA)的應(yīng)用說明
IFAVax不完全弗氏佐劑(IFA)是一種不含分枝桿菌的油包水乳液。IFAVax有三種量:#IFA0010:10mL,#IFA050:5x10毫升和#IFA0100:10x10毫升。
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艾美捷不完全弗氏佐劑(IFA)#OZB-IFA0100是一種油包水類似完全弗氏佐劑的乳液(CFA),不添加熱殺分枝桿菌(丁酸分枝桿菌)。IFA和CFA是最常用的佐劑,已廣泛用于實驗免疫學(xué)。IFA已用于數(shù)十年的獸醫(yī)疫苗接種實踐。IFAVax由礦物油和乳化劑的混合物組成85%v/v油和15%v/v乳化劑的比例。重要的是IFAVax不是預(yù)先形成的乳液,因此必須與等體積的抗原,隨后在使用前乳化。這個乳化劑是單油酸曼尼酯,一種由以下成分組成的酯親水性殘基甘露醇與油酸(不飽和C18脂肪酸)作為疏水部分。即使油乳液的作用機(jī)制仍然存在不太清楚,一些證據(jù)表明NOD2的要求。
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此外,這些乳液是容易在注射時引起細(xì)胞損傷,因此,壞死細(xì)胞死亡過程中釋放的內(nèi)源性信號也可能有助于它們的佐劑活性。像與主要誘導(dǎo)Th1應(yīng)答的CFA相反,IFA缺乏分枝桿菌成分,啟動Th2因此炎癥性較小。Th2結(jié)果的部分原因是庫效應(yīng)允許抗原在注射和抗體滴度的有效提高。弗氏佐劑旨在提供刺激強(qiáng)持久性所必需的抗原免疫反應(yīng)
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CFA的使用應(yīng)負(fù)責(zé)任且謹(jǐn)慎以避免或盡量減少過度炎癥。對于大多數(shù)應(yīng)用程序,CFA通常僅用于初始免疫,而IFA是選擇后續(xù)免疫接種。
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不完全弗氏佐劑(IFA)結(jié)果示例:

圖1:用卵清蛋白(OVA)或OVA+IFA免疫的小鼠中的抗體應(yīng)答。OVA特異性所有同種型(A)或IgG1亞類(B)的抗體在幾天后通過ELISA顯示用可溶性O(shè)VA或用IFA吸附的OVA免疫(adapted from Albuquerque D et al. VacciM 2011;20(2): 1-5)
圖2:使用或不使用IFA佐劑的血清抗體對免疫原反應(yīng)的比較。老鼠用PBS或IFA中的100μg抗體免疫。第7天測定抗體滴度(A) 和14(B)通過ELISA。改編自Gavin等人《科學(xué)2006》;314
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協(xié)議示例:
1.授權(quán)小鼠在免疫前至少7天適應(yīng)動物設(shè)施。
2.在100μL生理鹽水緩沖液中將抗原稀釋至100μg的濃度
3.使用2個鎖定路厄注射器制備方案中所述的OVA/CFA乳液,以獲得更好的乳液穩(wěn)定性
4.第1天:在小鼠背部的兩個部位皮下注射0.1mL在CFA中乳化的抗原小鼠的數(shù)量(每只小鼠總計0.2 mL)
注:每次注射后,將針頭插入皮下空間10至15秒,以避免乳液泄漏。小心地拔出針頭。
5.第14天:皮下注射0.1 mL在IFA中乳化的抗原,每次一次地點
注:建議在加強(qiáng)后7至10天采集血清樣本并檢測抗體濃度注射如果濃度低于預(yù)期,則可給予額外加強(qiáng)劑量的IFA乳液14天之后。
6.在最后一劑給藥后7至14天收集血清并純化抗體