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ITC測試是什么

2023-09-14 15:40 作者:sousepad材料檢測  | 我要投稿

等溫滴定量熱(Isothermal Titration Calorimetry,簡稱ITC)是一種廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和藥物研究領(lǐng)域的實驗技術(shù)。它通過測量溶液中的熱量變化,探究溶質(zhì)與溶劑之間的相互作用。

????????ITC測試原理基于熱力學(xué)法則,即溶液中的熱量變化與化學(xué)反應(yīng)或相互作用有關(guān)。儀器包含一個參照池和一個樣品池。參照池通常加入純水,樣品池加入待研究對象中的一種(一般為大分子,如蛋白質(zhì)),而滴定器里則裝有另一種研究對象稱之為配體(例如化合物)。在實驗過程中,配體被可控地滴入樣品池中(同時伴隨充分混合),一般為0.5到2μL,直到樣品池中的配體濃度2-3倍過量于樣品池中的蛋白濃度。每次滴定會產(chǎn)生一個熱量脈沖,通過對每一次滴定時熱量的積分并對濃度進行歸一化處理后生成摩爾放熱量(kcal/mol)對摩爾比率(配體/樣品)作圖,再選擇擬合合適的結(jié)合模型(Binding Models),獲取結(jié)合相關(guān)的親和力 (KD)、化學(xué)結(jié)合計量比 (n)、焓變 (ΔH) 和熵變 (ΔS)。

????????在ITC實驗中,溶液的溫度變化被轉(zhuǎn)換為功率曲線,曲線上的峰值表示熱量變化最大的點。通過分析這些峰值的形狀、位置和面積,可以獲得關(guān)于溶質(zhì)與溶劑相互作用的信息。例如,如果峰值位于注入量為零時刻,且峰值面積與注入量成正比,說明溶質(zhì)與溶劑之間存在明顯的結(jié)合作用。

????????ITC技術(shù)的優(yōu)勢在于它可以直接測量溶液中的熱量變化,無需事先了解溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)。因此,ITC能夠提供一種全面、定量的方法來研究溶質(zhì)與溶劑之間的相互作用。與其他常用的結(jié)構(gòu)分析技術(shù)相比,ITC測試可以在溶液中進行,無需晶體化或標記化處理,因此更加便捷和靈活。

????????ITC技術(shù)在生物化學(xué)和藥物研究中具有廣泛的應(yīng)用。例如,研究蛋白質(zhì)與配體之間的結(jié)合作用、藥物與靶點之間的相互作用、酶促反應(yīng)的熱效應(yīng)等。通過ITC實驗,可以獲得關(guān)于這些相互作用的定量信息,從而幫助研究人員理解生物體系中的化學(xué)過程,并為藥物設(shè)計和優(yōu)化提供重要的指導(dǎo)。

????????總之,等溫滴定量熱技術(shù)是一種基于熱力學(xué)原理的實驗技術(shù),通過測量溶液中的熱量變化,揭示了溶質(zhì)與溶劑之間的相互作用。它在生物化學(xué)和藥物研究中具有廣泛的應(yīng)用前景,為我們深入了解生物體系的化學(xué)過程提供了重要的工具和方法。

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