DiD是DiI的結(jié)構(gòu)類似物，?能快速穩(wěn)定地與磷脂細胞膜結(jié)合，用于細胞追蹤。激發(fā)和發(fā)射波長具顯著的紅色遷移，這一特征使其能夠避光自發(fā)熒光和光毒性效應(yīng)，以及適用于雙色標(biāo)記。

圖1.DiD熒光探針化學(xué)結(jié)構(gòu)

DiD紅色細胞膜熒光探針基礎(chǔ)信息

中文名：DiD細胞膜熒光探針紅色;DiD細胞膜熒光探針;活細胞長期染色的紅色熒光膜探針

英文名：DiD perchlorate；DiD;

CAS號：127274-91-3

結(jié)構(gòu)式：CCCCCCCCCCCCCCCCCCN1C2=CC=CC=C2C(C1=CC=CC=CC3=[N+](C4=CC=CC=C4C3(C)C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)(C)C.[O-]Cl(=O)(=O)=O

分子式 ：C61H99ClN2O4

分子量：959.9

溶解度：DMSO溶解度50 mg/mL

性狀：固體

儲藏條件 ：4°C, 避光 * 溶液中 : -80°C, 6 月; -20°C, 1 月 (避光)

DiD細胞膜熒光探針操作說明（僅供參考）?

1. 染色液制備
   （1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
   【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。
   （2）工作液制備：用合適的緩沖液稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
   【注】工作液最終濃度建議根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始最優(yōu)濃度的摸索。
   2.懸浮細胞染色
   （1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。
   （2）37 ℃孵育細胞 2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
   （3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。
   （4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。
   （5）重復(fù)（3）（4）步驟兩次以上。
   3.?貼壁細胞的染色
   （1）將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。
   （2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
   （3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
   （4）37 ℃孵育細胞 2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
   （5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸干培養(yǎng)基。
   4.?顯微鏡檢測
   DiD，DiO，DiI，DiR濾光器的選擇參見下表。 DiD染色可見紅色熒光。

   
   5.流式細胞儀檢測
   經(jīng)DiD，DiO，DiI，DiR染色的細胞可分別用流式細胞儀的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3或FL4通道檢測。

——biofount范德生物（貨號：YZM019910）