2019年末，被國際病毒分類委員會命名為嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2”(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的冠狀病毒開始流行，造成嚴(yán)重感染以及部分患者死亡，引起全世界的重視。2020年1月20日，國家衛(wèi)健委高級別專家組成員高福院士表示SARS-CoV-2是目前已知的第7種冠狀病毒，其余6種分別是人冠狀病毒299E（human?coronavirus 299E，HCoV-299E）、人冠狀病毒OC43（human coronavirus OC43，HCoV-OC43）、人冠狀病毒NL63?（human coronavirus NL63，HCoV-NL63）、人冠狀病毒HKU1（human coronavirus HKU1，HCoV-HKU1）、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV）和中東呼吸綜合征冠狀病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV）[1]。

冠狀病毒是具有外套膜的正鏈單股RNA病毒，1937年最先從雞身上分離出來，平均直徑100 nm，呈球形或橢圓形，病毒有包膜，包膜上存在棘突，整個病毒像日冕。其遺傳物質(zhì)是已知RNA病毒中最大的，多數(shù)感染野生動物，通過呼吸道分泌物排出體外，經(jīng)口液、噴嚏、接觸傳染、也通過空氣飛沫傳播，感染高峰期在秋冬和早春。其中SARS冠狀病毒的變種曾引起了2003的非典型性肺炎[2]。

SARS-CoV-2病毒傳染性強、危害大。目前，沒有特效的治療藥物，研究一套有效的治療方案仍非常必要。肺的上皮是人體內(nèi)環(huán)境中與外界接觸最大的表面，直接接觸吸入空氣中的病毒和細(xì)菌，從鼻咽到肺泡膜整個呼吸道的第一道防線是由先天免疫系統(tǒng)構(gòu)成的[3]。因此，建議應(yīng)用具有直接殺滅病毒感染細(xì)胞特性和免疫調(diào)節(jié)功能的圍產(chǎn)組織來源NK細(xì)胞回輸治療SARS-CoV-2感染肺炎患者。

據(jù)現(xiàn)有資料，SARS-CoV-2病毒主要是通過表面S蛋白與宿主細(xì)胞上的受體血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（angiotensin converting enzyme 2，ACE2）等結(jié)合進(jìn)入宿主細(xì)胞[4]，在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行增殖并擴散。臨床上病毒會引起患者全身性炎癥、高鐵血紅蛋白血癥、血流動力學(xué)不穩(wěn)定以及多器官衰竭的細(xì)胞因子風(fēng)暴綜合征（cytokine storm syndrome，CSS）[5]，據(jù)報道，在重癥監(jiān)護病房（intensive care unit，ICU）的重癥患者體內(nèi)白細(xì)胞介素2（interleukin 2，IL-2）、IL-7、IL-10[6]、粒細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte colony stimulating factor，G-CSF）、干擾素誘導(dǎo)蛋白10（interferon-inducible protein10，IP10）、單核細(xì)胞趨化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α（macrophage inflammatory protein 1α，MIP1α）和腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α）的血漿濃度高[7]。目前有兩大治療難點：第一，病毒藏在細(xì)胞內(nèi)，沒有特效藥；第二，嚴(yán)重病毒感染患者，免疫系統(tǒng)失調(diào)。

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自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞由造血干細(xì)胞發(fā)育而來，是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，是一類獨特的淋巴細(xì)胞亞群，占外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)的10%～15%[8]，總數(shù)以脾臟＞肺＞骨髓＞外周血＞淋巴結(jié)＞肝臟＞胸腺的順序分布，表面標(biāo)志物有CD3-、CD19-、CD16+、CD56+。成熟階段的 NK 細(xì)胞根據(jù)表型分為CD56低表達(dá)CD16高表達(dá)（CD56dimCD16+）細(xì)胞[9]、CD56高表達(dá)CD16不表達(dá)（CD56brightCD16-）細(xì)胞、CD56不表達(dá)CD16高表達(dá)（CD56negCD16+）細(xì)胞3個亞群[10]，占比約90%的CD56dimCD16+ NK細(xì)胞，以殺傷功能為主；占比約10%的CD56brightCD16-細(xì)胞，以分泌細(xì)胞因子為主。

NK細(xì)胞參與對多種病毒的免疫應(yīng)答反應(yīng)，NK細(xì)胞不同于T細(xì)胞、B細(xì)胞，是一類無需預(yù)先致敏就能非特異性殺傷病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的淋巴細(xì)胞[11]，NK細(xì)胞已被運用于治療多類疾病，疫情期間，國家衛(wèi)健委下發(fā)的《關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第二版）》提到可試用α干擾素（interferon α, IFN-α）霧化吸入，NK細(xì)胞可以大量產(chǎn)生干擾素[12]，其中的IFN-γ還被證明可以較為有效的預(yù)防或治療埃博拉病毒[13]。

01.NK細(xì)胞生物學(xué)功能

NK細(xì)胞的主要功能是免疫防御、免疫監(jiān)視和自身穩(wěn)定。具有獨立的功能，發(fā)揮殺傷活性無需預(yù)先致敏[14]，不受主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）分子限制[15]，病毒感染的細(xì)胞由于MHCⅠ類分子表達(dá)下降，可逃避T細(xì)胞識別，但能激活NK細(xì)胞，從而與T細(xì)胞互補協(xié)同起免疫防御作用。NK細(xì)胞發(fā)揮作用時對正常細(xì)胞沒有損傷，且對外界刺激應(yīng)答迅速，識別度高，強度大，是抗病毒階段的第一道免疫殺傷防線。具備強大的細(xì)胞因子和趨化因子分泌功能，有助于啟動和活化包括T細(xì)胞、B細(xì)胞在內(nèi)的其他免疫細(xì)胞，發(fā)揮機體整體免疫水平[16]。

目前，NK細(xì)胞在抗病毒免疫中的作用已經(jīng)得到了驗證，包括丙型肝炎病毒[17]、EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）[18]、乙型肝炎病毒[19]、巨細(xì)胞病毒[20]、甲型流感病毒[21]、艾滋病毒[22]等，所以從已知的NK細(xì)胞作用機制和SARS-CoV-2的特點上看，理論上來說治療應(yīng)該有效。

02.NK細(xì)胞的抗病毒機制

當(dāng)機體被病毒感染后，免疫系統(tǒng)會識別并產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，增加淋巴細(xì)胞數(shù)量抵抗病毒，殺傷病毒轉(zhuǎn)染的靶細(xì)胞。但特殊的病毒（SARS病毒和SARS-CoV-2等）不但轉(zhuǎn)染正常細(xì)胞，而且干擾免疫系統(tǒng)。所以可運用NK細(xì)胞的抗病毒機制，既有直接殺傷，又有免疫調(diào)節(jié)。

直接殺傷功能發(fā)揮作用無需預(yù)先致敏，單獨識別和攻擊異化的細(xì)胞。例如，經(jīng)由受體Fcγ受體Ⅲ（Fc receptor Ⅲ，F(xiàn)cγRIII/CD16）結(jié)合被抗體包被的病毒感染細(xì)胞會激活NK細(xì)胞[23]，通過這種識別模式，NK細(xì)胞對幾乎所有病毒感染細(xì)胞都具有特異性。

體內(nèi)循環(huán)的NK細(xì)胞通常處于休眠狀態(tài)，當(dāng)識別到被病毒轉(zhuǎn)染的靶細(xì)胞后就會被激活，通過釋放穿孔素在靶細(xì)胞表面穿孔，產(chǎn)生裂解顆粒（顆粒酶、顆粒溶素），這些分子可誘導(dǎo)靶細(xì)胞死亡。與此同時，分泌的細(xì)胞因子γ干擾素（interferon γ，IFN-γ）、多種腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）、IL-3等，通過與樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞相互作用來形成免疫應(yīng)答。

活化的NK細(xì)胞表面可表達(dá)凋亡相關(guān)因子Fas配體（Fas ligand，F(xiàn)asL）[24]和腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL），靶細(xì)胞進(jìn)入程序性凋亡狀態(tài)。

免疫調(diào)節(jié)功能，當(dāng)人體免疫功能正常發(fā)揮作用時，可有效的抵御大部分疾病，如果免疫力過強或過弱，便導(dǎo)致不同程度的疾病。NK細(xì)胞則具有免疫調(diào)節(jié)功能[25]，通過細(xì)胞因子調(diào)節(jié)內(nèi)環(huán)境，維持體內(nèi)免疫平衡。臨床研究發(fā)現(xiàn)，NK細(xì)胞與機體的其他免疫細(xì)胞通過相互作用平衡免疫狀態(tài)和免疫功能。

03.NK細(xì)胞的抗新冠病毒有效性

正常的機體組織細(xì)胞MHC I類分子與NK細(xì)胞表面的殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體（killer cell immnoglobulin-like receptor，KIR）結(jié)合產(chǎn)生抑制信號，避免了NK對自身健康細(xì)胞的誤傷，根據(jù)以往的臨床研究結(jié)果，回輸應(yīng)用NK細(xì)胞沒有發(fā)現(xiàn)不良副作用[26]，已具備了作為臨床應(yīng)用的安全性和有效性。

圖片來自文獻(xiàn)28

據(jù)報道，已有多項NK細(xì)胞治療臨床試驗項目同時開展，例如：

①課題: “臍血NK細(xì)胞聯(lián)合臍血間充質(zhì)干細(xì)胞用于治療新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)的臨床研究 (ChiCTR2000029817) ”；評估聯(lián)合臍血分離出的NK細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞治療新冠肺炎的安全性與有效性。

②2020年4月2日，美國FDA批準(zhǔn)允許在人體中測試：“一種來源于胎盤干細(xì)胞的同種異體現(xiàn)貨型NK細(xì)胞療法CYNK-001治療COVID-19的療效”；將開展的I/II期臨床試驗預(yù)計招募86例COVID-19成人患者，研究人員認(rèn)為NK細(xì)胞進(jìn)入患者體內(nèi)后可殺死被新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）感染的人體細(xì)胞，并解決免疫系統(tǒng)導(dǎo)致的炎癥問題。

③河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院朱武凌教授: “臍帶血NK細(xì)胞治療冠狀病毒感染重癥患者的臨床研究（201100311100）”；針對應(yīng)急救治新型冠狀病毒感染發(fā)病的患者和高危人群感染開展臨床研究。

綜上所述，COVID-19可以說是人類近代史上最嚴(yán)重的流行病，但SARS-CoV-2的感染機制尚不完全清楚，臨床治療主要以對癥治療為主[27]，鑒于傳播還在繼續(xù)，疫苗開發(fā)耗時又長。因此可使用安全、有效、便利的圍產(chǎn)組織來源的NK細(xì)胞，其長期冷凍保存也不會影響分離出的NK細(xì)胞擴增能力與免疫調(diào)節(jié)功能，圍產(chǎn)組織來源的NK細(xì)胞更加年輕，增殖能力更強，靶細(xì)胞殺傷效率也更高，將其應(yīng)用于SARS-CoV-2感染肺炎的預(yù)防和治療，前景可期。

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