五月天青色头像情侣网名,国产亚洲av片在线观看18女人,黑人巨茎大战俄罗斯美女,扒下她的小内裤打屁股

歡迎光臨散文網(wǎng) 會員登陸 & 注冊

細菌內(nèi)毒素(脂多糖)的提取之PCP法、高壓超聲處理法及DMSO法的介紹

2022-09-09 09:46 作者:科德角國際內(nèi)毒素檢測  | 我要投稿

一、苯酚╱氯仿╱石油醚法PCP

LPS分子鑲嵌于胞壁的外膜中,用某些化學試劑將胞壁裂解(如酚)后,LPS分子從破潰的胞壁中游離出來。由于LPS是一種兩性分子,故它們在不同溶劑中的溶解度,完全取決于該分子上的親水/疏水性基團的多少。S-LPS有完整的親水性О特異性側(cè)鏈,所以S型LPS屬親水性分子。而R型LPS,缺乏O特異性側(cè)鏈,含有完整或不完整的核心多糖和完整的類脂A,親水度不大,而易溶于有機溶劑中,故而R-LPS用酚水法提取時所得的產(chǎn)量極低。

PCP法是以90%苯酚、氯仿及石油醚(40~60℃)以2:5:8所組成的單相混合提取液,這一提取方法只能將LPS及與之緊密結(jié)合的透道蛋白(Porin)提取出來,而其它成分則排除在提取液外。PCP法的水沉淀步驟僅能使LPS發(fā)生沉淀,而透道蛋白仍溶于苯酚中,故而PCP法所提取的LPS是一種較為純化的制劑。

PCP法對制取R型細胞的LPS產(chǎn)量十分滿意,且無核酸污染,蛋白質(zhì)含量也僅在0.1~1 %間,該法溫和,在室溫5~20℃即可完成,制取周期較短,適用于從Ra至Re的細菌,可成功地提取R-LPS,產(chǎn)量也相當高。故PCP法是研究R-LPS的有用方法。應必須注意的是在PCP法中,每一步操作均不應使用鹽類,如MgCl2、CaCl2,否則會嚴重影響產(chǎn)量。

二、高壓超聲處理法

以某些物理方法(如超聲波)處理菌體細胞,使其完全破裂,可增加繼后提取方法的完全性,從而可使LPS的產(chǎn)率增加。Richard1983研制了一種既可提取光滑型又可提取粗糙型LPS的新方法。該方法采用了高壓處理(15000Ib/in2)細菌的方法,粉碎菌細胞,繼又用超聲波處理,促進碎片完全裂解,再以DNa?s?e,RNa?s e處理,消化核酸。再加入蛋白酶去消化蛋白質(zhì),離心12000xg,濃縮干燥。如此制得的LPS,產(chǎn)量為菌體的51~81%(按測脂肪酸、庚糖和KDO值),蛋白質(zhì)為0.1%、核酸1 %、脂類2~5%,純度較高,產(chǎn)量比酚水法高7倍,比PCP法高2倍。

所得LPS經(jīng)各種免疫化學分析,均提示用此方法提取的LPS其抗原結(jié)構(gòu)完整。其不足之處是堿性條件上的加熱,以前認為這一處理在于除掉蛋白質(zhì),特別是對于有些細菌(如綠膿桿菌)有用,但對別的細菌恐屬多余。應當指出的一點是,堿性加熱條件使類脂體A上的脂肪酸酯降解。另外一個不足之處是,此方法較為復雜,不易被一般實驗室采用。

三、DMSO法

Adams介紹了一種較為簡單的LPS提取方法。該法應用二甲亞砜(Dimethyl?Sulfoxide,DMSO)作為主要提取試劑。以胞壁原料提制LPS。主要步驟為將預先制取的干燥胞壁以60℃DMSO提取水洗,酸化丙酮處理,冷凍干燥。DMSO法提取的LPS產(chǎn)量是酚水法的10倍,但蛋白質(zhì)含量很高(45%) 。

免責聲明:

本文節(jié)選自:《細菌內(nèi)毒素(脂多糖提取及其純化技術(shù)》,文章作者:周炳榮。如有侵權(quán),請聯(lián)系刪除,謝謝!


細菌內(nèi)毒素(脂多糖)的提取之PCP法、高壓超聲處理法及DMSO法的介紹的評論 (共 條)

分享到微博請遵守國家法律
吉隆县| 石河子市| 安溪县| 沙雅县| 韶关市| 辰溪县| 思茅市| 鄯善县| 巧家县| 临武县| 宜都市| 樟树市| 连州市| 夏邑县| 福清市| 沙洋县| 宝应县| 枣庄市| 商城县| 临汾市| 鄂托克旗| 永昌县| 越西县| 高唐县| 翁牛特旗| 刚察县| 上杭县| 怀远县| 潢川县| 普定县| 灌南县| 西丰县| 布拖县| 中阳县| 怀集县| 军事| 宝丰县| 会宁县| 广河县| 承德市| 莒南县|