什么是1型限制酶？

1 型限制性酶是一種復(fù)雜的多亞基酶，同時(shí)具有限制性和甲基化酶活性。 此外，它首先在大腸桿菌菌株中被發(fā)現(xiàn)。 此外，它由三個(gè)不同的亞基組成； HsdR、HsdM 和 HsdS 在這里，HsdR 進(jìn)行限制性消化，HsdM 進(jìn)行甲基化，而 HsdS 對(duì)于識(shí)別位點(diǎn)和甲基化位點(diǎn)的識(shí)別都很重要。

圖 1：EcoR I 同型二聚體結(jié)構(gòu)

限制性內(nèi)切酶 1 在距離限制性識(shí)別位點(diǎn)超過(guò) 1000 bp 的隨機(jī)距離處切割 DNA。 此外，這種隨機(jī)切割之后是 DNA 易位，因?yàn)檫@種酶充當(dāng)分子馬達(dá)。 另一方面，限制酶1基因在原核基因組中更為常見(jiàn)。 然而，盡管 1 型限制性內(nèi)切酶具有生化重要性，但由于會(huì)產(chǎn)生離散的限制性片段，因此其實(shí)用價(jià)值不大。

什么是限制酶類型 2？

2 型限制性內(nèi)切酶是另一種類型的限制性內(nèi)切酶，在限制性識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)或附近的特定位置切割 DNA。 此外，它的識(shí)別位點(diǎn)是回文的，長(zhǎng)度為 4-8 個(gè)核苷酸。 通常，它是具有獨(dú)立限制和甲基化酶活性的同型二聚體。 另一方面，它只需要鎂作為輔助因子，而不使用 ATP。

圖 2：EcoR I 限制識(shí)別站點(diǎn)

由于通過(guò)在識(shí)別位點(diǎn)處或附近進(jìn)行特異性切割，通過(guò)限制性消化產(chǎn)生離散片段，因此 2 型限制性內(nèi)切酶更常用于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行 DNA 分析和克隆。 例如，2 型限制性內(nèi)切酶有幾個(gè)結(jié)構(gòu)完全不同的家族。 它們包括 2B、2E、2F、2G、2S 和 2T 型限制酶。

什么是限制性內(nèi)切酶 3 型？

3 型限制性內(nèi)切酶是第三種類型的限制性內(nèi)切酶，識(shí)別兩個(gè)獨(dú)立的非回文序列，它們是反向的。 此外，它在識(shí)別位點(diǎn)下游約 20-30 bp 處切割 DNA。 通常，3 型限制酶是具有兩個(gè)不同亞基的異二聚體。

圖 3：限制性酶在克隆中的作用

?限制性內(nèi)切酶 1 型是在同一大酶復(fù)合物中同時(shí)具有限制性和甲基化酶活性的限制性內(nèi)切酶類型之一。 通常，它由三個(gè)不同的亞基組成。 此外，它的切割位點(diǎn)是隨機(jī)的，距離識(shí)別位點(diǎn)大約 1000 bp。 另一方面，2型限制酶是另一種具有獨(dú)立限制和甲基化酶活性的限制酶。 此外，它是一種同型二聚體，可在識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)或附近切割 DNA。 同時(shí)，3型限制酶是第三種限制酶。 重要的是，它還同時(shí)具有限制性和甲基化酶活性。 然而，它是一種異二聚體，可在距離識(shí)別位點(diǎn) 24-26 bp 處隨機(jī)切割 DNA。 因此，限制酶 1、2 和 3 型之間的主要區(qū)別在于它們的結(jié)構(gòu)和切割模式。