1，材料

a，

b，一段已知的目的基因序列

c，通過(guò)軟件獲得的一個(gè)GC含量數(shù)據(jù)分析

2，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

a，正常引物

b，正向擴(kuò)增引物

c，通用引物，兩個(gè)模板被此引物測(cè)出了序列

d，設(shè)置了負(fù)對(duì)照，通過(guò)正常引物擴(kuò)增，只是將模板換成水

3，操作

a，拿加樣槍要穩(wěn)，加樣要準(zhǔn)，充分混勻

b，標(biāo)記組名，放入機(jī)器操作

c，設(shè)置

退火溫度根據(jù)gc含量決定的

延伸時(shí)間由所擴(kuò)增的基因片段長(zhǎng)度決定的

d，反應(yīng)結(jié)束取出

e，取1ulloading buffer置于點(diǎn)樣板上

再加4ul待檢測(cè)樣品與其充分混合

f，取5ul混合好的樣品點(diǎn)到瓊脂糖凝膠樣孔中進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)

g，設(shè)置電泳條件為220v，7min

h，結(jié)果

4，注意

a，反應(yīng)程序參數(shù)設(shè)置，先用相應(yīng)軟件分析序列，得出理論值需要注意

b，模板是已知質(zhì)粒

c，粒子，多條引物混在一起，需要擴(kuò)增兩輪

未知的序列擴(kuò)增需要設(shè)置很多的平行對(duì)照

e，凝膠電泳里EB溴化乙錠是劇毒