PC12細(xì)胞簡(jiǎn)介

PC12細(xì)胞是大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞株，具神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的一般特征，因其具可傳代特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)生理和神經(jīng)藥理學(xué)研究。

細(xì)胞名稱：大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞細(xì)胞別名：PC-12; PC 12貨號(hào)：TCR-C617規(guī)格：1X10^6細(xì)胞形態(tài)：多角形細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)體系：RPMI-1640+5%FBS+15%馬血清+1%P/S

PC12細(xì)胞有未分化型和分化型。分化型又分為低分化與高分化，這三者的最大的區(qū)別主要在形態(tài)上。

未分化的PC-12從形態(tài)上看是圓形的、聚團(tuán)生長(zhǎng)的懸浮細(xì)胞；低分化的成多角形、有較短的突起；高分化的細(xì)胞有多個(gè)突起，突起數(shù)目不等，突觸較長(zhǎng)，類(lèi)似神經(jīng)元軸突。低分化和高分化是在未分化的PC-12基礎(chǔ)上誘導(dǎo)產(chǎn)生的，低分化和高分化指的是與神經(jīng)細(xì)胞表型的相似程度，高分化更接近神經(jīng)細(xì)胞表型。
未分化型的PC12細(xì)胞貼壁能力強(qiáng)，傳代時(shí)需要胰酶消化，形狀不規(guī)則。分化型PC12細(xì)胞傳代時(shí)不需要胰酶，直接可以吹下來(lái)，形狀規(guī)則。這兩種細(xì)胞沒(méi)有很大的區(qū)別，但我在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，未分化型的PC12細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性較之分化型的要差一些。

PC12細(xì)胞培養(yǎng)

（1）由于PC12細(xì)胞是一種腫瘤細(xì)胞，在傳代次數(shù)較多后，它的形狀和性狀會(huì)發(fā)生改變。這些改變尤見(jiàn)于未分化型PC12細(xì)胞。主要是細(xì)胞形狀變得更加不規(guī)則，對(duì)藥物的敏感性愈加下降。因此，建議長(zhǎng)期用PC12細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)的戰(zhàn)友最好嚴(yán)格控制細(xì)胞的傳代次數(shù)。

（2）在復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)動(dòng)作一定要迅速，放入溫水中1～2min后要馬上加入培養(yǎng)液中，培養(yǎng)12～24小時(shí)后更換一次培養(yǎng)液，這樣不僅可以把DMSO吸掉，而且可以將死亡的細(xì)胞也吸掉。細(xì)胞一天一看即可，經(jīng)常動(dòng)會(huì)有影響。注意過(guò)濾后血清的PH值，因?yàn)榕囵B(yǎng)液過(guò)濾后PH值會(huì)有所改變。復(fù)蘇后的換液時(shí)間取決于您復(fù)蘇時(shí)是否洗滌離心細(xì)胞，去除了凍存液中的DMSO，如果沒(méi)有去除DMSO，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜后就要徹底換液；如果復(fù)蘇時(shí)洗滌離心過(guò)，可以待傳代時(shí)再換液也可。（最好還是復(fù)蘇時(shí)去除DMSO，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)好一些）。

（3）狀態(tài)良好的細(xì)胞復(fù)蘇后 4 h即可貼壁，開(kāi)始增殖，大約2 d即可傳代，接種48 h應(yīng)該到了對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期。
（4）每天觀察一兩次細(xì)胞我不認(rèn)為會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成不良影響，不過(guò)每次觀察的時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)。

（5）傳代時(shí)最好不要用胰蛋白酶，因?yàn)橐鹊鞍酌笇?duì)細(xì)胞有破壞作用。之前用胰蛋白酶消化傳代過(guò)PC12, 結(jié)果傳代后的細(xì)胞雖然貼壁，形態(tài)也好，但就是增殖緩慢，所以我現(xiàn)在都是用槍吸取培養(yǎng)液直接吹打，傳代后細(xì)胞增殖迅速，2 d就長(zhǎng)滿了（因?yàn)殚L(zhǎng)的太快，只好降低血清濃度，用5%FBS）

（6）傳代的時(shí)機(jī)最好選在細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，占瓶底70%－80%時(shí)最好，如果細(xì)胞長(zhǎng)的太滿，細(xì)胞的狀態(tài)會(huì)越來(lái)越差，最后大片死亡；這種細(xì)胞傳代后生長(zhǎng)也不好；而且長(zhǎng)得太滿后，細(xì)胞貼壁牢，難于吹起來(lái)，相反，70%－80%時(shí)細(xì)胞很容易吹起來(lái)。

（7）如果細(xì)胞貼壁太緊，不得不用胰蛋白酶消化，注意低濃度，段時(shí)間，多洗滌。我一般用0.025％的胰蛋白酶，在鏡下觀察細(xì)胞突起收縮，有零星的細(xì)胞飄起就中止，或用肉眼觀察，瓶底呈現(xiàn)薄霧狀的模糊感時(shí)就中止，中止一定要徹底，要用含血清的培養(yǎng)液多洗滌離心幾次，確保去除剩余的胰蛋白酶，否則傳代后的細(xì)胞難以生長(zhǎng)。

（8）更多的培養(yǎng)注意要求，可在我們網(wǎng)站查詢?www.cas9x.com/jszt/105304.html

PC12細(xì)胞應(yīng)用

阿爾茨海默病 (AD)、帕金森病 (PD)、肌萎縮側(cè)索硬化癥和亨廷頓病等神經(jīng)退行性疾病的標(biāo)準(zhǔn)治療可恢復(fù)神經(jīng)遞質(zhì)的平衡，從而使神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能正常。雖然大多數(shù)藥物方案可以改善病人的生活質(zhì)量，但它們并沒(méi)有解決潛在病因，因此不會(huì)阻止身體的退化過(guò)程。

雖然神經(jīng)生長(zhǎng)因子 (NGF) 、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 (BDNF) 和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3/神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4等營(yíng)養(yǎng)分子的內(nèi)源性合成可以有效地刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)、修復(fù) ，但治療應(yīng)用受限于廣泛的副作用，例如神經(jīng)性疼痛 、膀胱疼痛、泌尿疼痛、皮膚瘙癢 (瘙癢) 特應(yīng)性皮炎 、深層組織壓痛 、炎癥惡化如關(guān)節(jié)炎、哮喘 、椎間盤(pán)退變和癌癥。

此外，各種神經(jīng)元組織中 NGF 水平升高會(huì)導(dǎo)致行為障礙和認(rèn)知障礙，例如自閉癥 、雙相情感障礙和注意力缺陷、多動(dòng)障礙。鑒于 NGF 的不良全身效應(yīng)，似乎需要在小分子 NGF 模擬物的鑒定和開(kāi)發(fā)方面開(kāi)展研究工作。

只有少數(shù)已知的 NGF 模擬物，如 GK-2 h，它們?cè)趯?shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭酗@示出促進(jìn)神經(jīng)元存活、分化和突觸可塑性的能力，需要篩選多種天然植物提取物和多酚類(lèi)物質(zhì)，在大鼠多巴胺能嗜鉻細(xì)胞瘤 PC-12 細(xì)胞中發(fā)揮 NGF 相同作用的物質(zhì)。

a. 高通量篩選 1144 種植物多酚類(lèi)藥物、合成/對(duì)照藥物（包括塞來(lái)昔布、布洛芬、紫杉醇等）和 947 種常用藥草和香料的水提取物，在 PC-12 細(xì)胞中相對(duì)于 NGF 誘導(dǎo)神經(jīng)突生長(zhǎng)的能力，在膠原蛋白包被板上超過(guò) 7 天。在初始篩選中，隨后使用全劑量范圍進(jìn)行驗(yàn)證，僅闡明了一種陽(yáng)性 NGF 模擬物。

b. 7天時(shí)PC12細(xì)胞神經(jīng)突生長(zhǎng)的形態(tài)學(xué)分析；對(duì)照（上）NGF 0.5 μg/mL（中）和 MCS 提取物（150 μg/mL）（下）?

建立細(xì)胞模型，常用PC-12未分化細(xì)胞，用NGF（神經(jīng)生長(zhǎng)因子）誘導(dǎo)，可以使細(xì)胞出現(xiàn)交感神經(jīng)細(xì)胞樣改變，用于后續(xù)的研究。通過(guò)多篇文獻(xiàn)的研究，最佳的NGF的濃度為50ug/L，作用時(shí)間為48h，100mmol/L的乙醇可以增強(qiáng)NGF的誘導(dǎo)作用。

涉及到的信號(hào)通路是MAPK，ERK總蛋白在NGF作用前后無(wú)明顯變化，作用5分鐘后，磷酸化p-ERK蛋白顯著升高，達(dá)到峰值，推測(cè)是為整個(gè)分化提供起始信號(hào)，進(jìn)程一旦啟動(dòng)，會(huì)被迅速降解。

參考文獻(xiàn)

1、E. Mazzio、B. Georges、O. McTier、Karam F. A. Soliman. Neurotrophic Effects of Mu Bie Zi (Momordica cochinchinensis) Seed Elucidated by High-Throughput Screening of Natural Products for NGF Mimetic Effects in PC-12 Cells. Neurochem Res. 2015 Oct; 40(10): 2102-2112. [PMC free article]

2、Gallant KL Chan、Winnie WH Hu 、Zoey X. Zheng. Quercetin Potentiates the NGF-Induced Effects in Cultured PC 12 Cells: Identification by HerboChips Showing a Binding with NGF. Evid Based Complement Alternat Med. 2018; 2018: 1502457. ?[PMC]

作者：海星生物

公眾號(hào)：海星生物科技

以上內(nèi)容由海星生物（http://www.cas9x.com)提供?

我們的服務(wù)：CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯、載體構(gòu)建/病毒包裝、分子診斷標(biāo)準(zhǔn)品/突變基因標(biāo)準(zhǔn)品/融合基因標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)/細(xì)胞干擾

我們的產(chǎn)品：HyCyte干細(xì)胞/原代細(xì)胞/細(xì)胞株、三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、ClonePlus 專用培養(yǎng)基、基因編輯試盒、病毒現(xiàn)貨、細(xì)胞專用血清?