GelRed完美替代?溴化乙錠?(EtBr)
溴化乙錠 (EtBr) 一直是核酸染色的首選產(chǎn)品； 但是，您可能很清楚使用這種化學品所涉及的風險。BIOFOUNT 推出的一種更受歡迎、更安全的替代品是 GelRed。 如果您一直在對該產(chǎn)品或其他替代品進行任何類型的研究，本文將幫助回答您關于 GelRed 靈敏度、安全性、使用和故障排除的一些大問題。

GelRed?是一種高度敏感的熒光核酸染料，當被透照儀激發(fā)時會起作用。?GelRed旨在替代被認為具有致癌性和致突變性的 EtBr。 眾所周知，GelRed@TM 非常敏感，無需脫色步驟。 為了讓制造商確保其設計是安全的，GelRed@TM 進行了各種測試，結(jié)果表明它是無毒、無誘變性和無危險的，即使在非常高的濃度下也是如此。 GelRedTM 具有安全性更高、處置麻煩更少的優(yōu)勢，同時仍提供與?EtBr功能相似的結(jié)果。
有了這些優(yōu)點，缺點是什么？ 好得令人難以置信嗎？ 為了回答這個問題，讓我們看看人們在使用 GelRed@TM 之前或期間遇到的一些最常見的問題：

GelRed 是如何工作的？
與溴化乙錠一樣，GelRedTM 是一種嵌入 DNA 的核酸染料。GelRed 僅通過嵌入結(jié)合。

當顯示紫外光時，嵌入的 GelRed TM 會發(fā)出熒光，產(chǎn)生明亮的橙色光。 兩種產(chǎn)品的光譜幾乎相同； 然而，GelRedTM 被認為是比 EtBr 更安全的替代品，而且更敏感。 GelRedTM 的另一個好處是它能夠與 dsDNA、ssDNA 和 RNA 一起工作，而對于 dsDNA，它的靈敏度是 ssDNA 和 RNA 的兩倍。

如果?GelRed?是一種嵌入劑，為什么它沒有與溴化乙錠相同的風險？

這真是一個好問題！ 如果它仍然要直接與 DNA 結(jié)合，想知道它如何才能真正安全似乎是合乎邏輯的。 雖然 GelRed 和 EtBr 都嵌入 DNA，但 GelRed 的創(chuàng)建使其不會穿透細胞膜。 因為它不能穿透細胞膜，所以 GelRedTM 對活細胞沒有毒性。
當 GelRed TM 和 GelGreen TM 被開發(fā)出來時，科學家們專注于創(chuàng)造一種具有三個主要特征的產(chǎn)品：它不能穿透乳膠手套，它不能穿透細胞膜，它會被代謝成化合物 與DNA幾乎沒有相互作用。
為確保 GelRed TM 和 GelGreen TM 實現(xiàn)這些目標，GelRed TM 和 GelGreen TM 使用手套穿透測試、Ames 測試、細胞滲透性和細胞毒性測試以及環(huán)境安全測試進行了測試。

GelRed?與?溴化乙錠?相比如何？
為了回答這個問題，讓我們以幾種不同的方式將 GelRedTM 與 EtBr 進行比較：

※ 安全
※ 程序
※ 成本
※ 靈敏度
※ DNA遷移
下面的圖表已經(jīng)可以開始幫助可視化比較的各個方面。 眾所周知，GelRed 使用起來比 EtBr 更安全，但它也具有相同（如果不是更好）的靈敏度，在易于處理方面表

GelRed 染色的最佳使用條件是什么？如何防止 DNA 條帶模糊？我應該為 GelRed 使用什么過濾器？

確保優(yōu)化程序的第一個重要方法是使用 GelRedTM 而非預制凝膠進行后染色。后染色將降低 GelRedTM 干擾 DNA 遷移的風險，并為您提供最佳靈敏度。如果您正在使用聚丙烯酰胺凝膠，請完全避免使用預制染色劑，因為不建議這樣做。
如果您進行了預制染色并且條帶變得模糊，您可以嘗試一些方法來解決此問題：
將 DNA 上樣量減少二分之一至三分之一（<400ng）。 GelRedTM 比溴化乙錠更敏感。拖尾條帶通常是過載的結(jié)果，這通常在 DNA 梯中觀察到。
切換到后染色而不是預制染色。
嘗試倒入較低百分比的凝膠，尤其是在處理較大的片段時。
如果您使用的是 TAE 緩沖液，請嘗試使用 TBE。 TBE 具有比 TAE 更高的緩沖能力。

為什么?GelRed?會改變 DNA 的遷移？

GelRedTM 影響 DNA 遷移的原因有很多。 請記住，所有核酸染料都會對 DNA 的移動方式產(chǎn)生一定的影響。 GelRedTM 是一種比 EtBr 重得多的染料，GelRed 對 DNA 的親和力意味著凝膠中加載的 DNA 越多，GelRedTM 與 DNA 結(jié)合并扭曲該片段的運動的次數(shù)就越多。
一些防止或最小化 GelRedTM 對遷移影響的建議是： 將其用作后染色劑（我們對此再強調(diào)不過分）。 確保您的 GelRedTM 儲備溶液已適當稀釋。 您可能還需要減少您使用的 DNA 量，以盡量減少遷移干擾的影響。

GelRed 和 GelGreen 有什么區(qū)別？
第一個主要區(qū)別是每種產(chǎn)品的熒光。 如您所料，GelRedTM 會發(fā)出類似于溴化乙錠的紅色熒光。 正如您所料，GelGreenTM 會發(fā)出與 SYBR? Green 非常相似的綠色熒光。 任何一種產(chǎn)品都可以與紫外線透射儀一起使用。
另一個區(qū)別是染色敏感性。 GelRedTM 是一種比 GelGreenTM 更敏感的染色劑（靈敏度大約是 GelGreenTM 的五倍），尤其是對于單鏈核酸。
在應用方面，GelRed與聚丙烯酰胺凝膠兼容，但不推薦用于 GelGreenTM。
最后，使用 GelGreen 的一個優(yōu)點是它與藍光透射儀的兼容性，如果您想避免紫外線照射，這將很有幫助

DMSO GelRed 和水性 GelRed 有什么區(qū)別？
我們提供 DMSO 或水中的 GelRedTM 和 GelGreenTM 產(chǎn)品。 但是，建議選擇有助于防止使用中任何潛在危害的水配方，因為 DMSO 能夠被皮膚吸收。 這兩種選擇仍然適用于長期使用 DMSO 配方的研究人員。

GelRed 是否與 ssDNA 和 RNA 兼容？它與Southern印跡兼容嗎？

GelRedTM 絕對兼容單鏈 DNA 和 RNA。然而，它對雙鏈 DNA 的靈敏度是其兩倍。
對于 Southern 印跡應用，GelRedTM 是兼容的。但如果您進行印跡應用，強烈建議使用染色后方案。

GelRed 與哪些下游應用兼容？

GelRedTM 在結(jié)構(gòu)上與溴化乙錠相似，并且與下游 DNA 應用兼容，包括限制性消化、連接、測序和克隆。 GelRedTM 還與氯化銫梯度兼容，可用于 Southern 印跡應用和 Comet 測定（單細胞凝膠電泳）。
GelRedTM 的另一個好處是它與紫外線透射儀兼容，無需更改設置；您可以使用 GelRedTM 的溴化乙錠過濾器。 SYBR? 和 GelStarTM 過濾器也與 GelRedTM 兼容。

如何解決 GelRed 的問題？
我們的 GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X 實驗方案包含大量故障排除信息，如果您遇到預制凝膠中的條帶拖尾、預制凝膠中 DNA 遷移差異或熒光弱等問題，這些信息將特別有用。