如何養(yǎng)死細(xì)胞

養(yǎng)細(xì)胞太難，難于上青天。本人實(shí)驗(yàn)室萌新一枚，進(jìn)實(shí)驗(yàn)室時(shí)間不長(zhǎng)，但養(yǎng)死了不少細(xì)胞，耽誤了課題進(jìn)展，錯(cuò)失了發(fā)SCI最好的時(shí)機(jī)，應(yīng)導(dǎo)師要求，我總結(jié)出了一千零一種養(yǎng)死細(xì)胞的慘痛方法，附帶實(shí)驗(yàn)室造污攻略。

本人經(jīng)歷過的養(yǎng)死細(xì)胞情況如下：
培養(yǎng)基種類不對(duì)，死了
血清濃度不對(duì)，死了血清質(zhì)量不行，死了
傳代時(shí)胰酶消化時(shí)間太長(zhǎng)，死了
用槍吹得太猛，死了
細(xì)胞長(zhǎng)得太滿，死了
忙于戀愛，好幾天不去看細(xì)胞，死了
一天把細(xì)胞拿出來看好多次，死了
傳代次數(shù)太多，細(xì)胞老去，死了
傳細(xì)胞時(shí)，光顧著和同門聊劇，細(xì)菌污染了，死了
離心轉(zhuǎn)速太高，死了離心時(shí)間太長(zhǎng)，死了
培養(yǎng)瓶或細(xì)胞板反復(fù)用，貼壁性不好，死了
分瓶時(shí)細(xì)胞密度太低，死了
培養(yǎng)瓶拿燈烤的太熱，死了
培養(yǎng)瓶瓶蓋擰太緊，死了
培養(yǎng)箱太熱了，死了
培養(yǎng)箱太干了，死了
培養(yǎng)箱沒二氧化碳了，死了
實(shí)驗(yàn)室停電了，死了
黑膠蟲來襲，死了
還有更可怕的，還是第一千零一種死法~實(shí)驗(yàn)室來了新人，死了

本人實(shí)在不才，一千零一種養(yǎng)死細(xì)胞的經(jīng)歷，我全攤上了。接下來，我應(yīng)導(dǎo)師的再三逼迫，從實(shí)驗(yàn)根源上日常操作中開始檢討，我在實(shí)驗(yàn)室犯過的七宗罪，（由于篇幅有限，先更七宗罪）以此祭奠被我害死的細(xì)胞，順便給實(shí)驗(yàn)室萌新敲個(gè)警鐘。檢討如下：

1第一宗罪：無菌觀念薄弱，穿戴不規(guī)范

首先，我要反思下我進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的懶惰和僥幸心理，有時(shí)候進(jìn)細(xì)胞房懶得換鞋，懶得戴口罩，甚至不戴手套，帽子。

我知道，換鞋是為了隔離真菌。戴口罩是為了防止口腔支原體污染細(xì)胞。不戴手套，根本就清除不掉手上的細(xì)菌真菌，我明知，以上懶惰造成的不規(guī)范行為，是細(xì)胞房的大忌諱，還故犯，實(shí)屬罪加一等。

2第二宗罪：實(shí)驗(yàn)用品亂擺放

生物安全柜里操作時(shí)，門前最忌諱堆一堆雜七雜八的東西，然而，我的槍頭盒、血清、管子，培養(yǎng)皿、移液器、酒精噴壺、酒精燈，堆積如山，我承認(rèn)我沒有好好整理它們。

我知道，一旦它們堵住了安全柜門前的出風(fēng)口，就會(huì)有雙重不良影響。我試過，這樣子實(shí)驗(yàn)操作起來會(huì)容易手忙腳亂，導(dǎo)致動(dòng)作幅度過大，擾亂氣流。

其次是，這些堆積的實(shí)驗(yàn)用品一旦擋住風(fēng)口，也會(huì)擾亂生物安全柜的氣流，氣流變化會(huì)導(dǎo)致外部不潔凈的空氣流入，也同樣會(huì)導(dǎo)致生物安全柜的潔凈作用失效。

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第三宗罪：亂用紫外線和酒精滅菌

我明知，紫外和酒精最多只能滅細(xì)菌，對(duì)真菌傷害很小。我不該不戴手套，僅用噴壺噴手。我知道，超凈臺(tái)要盡量要用酒精棉球而不是用酒精噴壺，因?yàn)橛镁凭耷虻脑?，可以在滅菌的同時(shí)把菌體從手上擦下去，而噴壺只能短暫的滅了下菌而已。

所以，我以后一定要改掉這個(gè)毛病，多用棉球，少用噴壺。

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第四宗罪：不定期清理水浴鍋

我發(fā)現(xiàn)，水浴鍋是實(shí)驗(yàn)室比較容易忽視的一種存在，復(fù)蘇細(xì)胞的時(shí)候，37℃對(duì)細(xì)菌真菌來說就是溫床。復(fù)蘇細(xì)胞后，濕漉漉的凍存管，任我再怎么噴酒精也并沒有什么意義了。

所以，我發(fā)誓以后一定要，定期清潔水浴鍋，在清潔時(shí)務(wù)必加一些抑菌劑。注意：我不是要往里面加雙抗，水浴鍋里要加2%的硫酸銅，雖然這比較容易腐蝕水浴鍋?？傊?，一定要定期清潔。

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第五宗罪：疏于管理導(dǎo)致水盤污染

我深知，培養(yǎng)箱的水盤坐擁37℃溫床的水環(huán)境，水盤里若是飄著特別大的一塊塊霉斑，一污染就一箱子全報(bào)廢了，所以，我將謹(jǐn)記導(dǎo)師教誨，培養(yǎng)箱要定期用0.1%的新潔爾滅或者84清洗，交替使用，防止微生物耐藥。

預(yù)防水盤污染也很重要，水盤中加入飽和的磷酸氫二鈉可以有效預(yù)防細(xì)菌真菌，但是需要定期加入去離子水防止析出。

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第六宗罪：滅菌滅不好

我知道，細(xì)胞房所有在用的槍頭，必須要經(jīng)過濕熱滅菌，用報(bào)紙包裹好槍頭，這樣做是因?yàn)闇缇佉话阍诩?xì)胞房外面，所以要保證內(nèi)部槍頭盒潔凈。

烤干是為了防止內(nèi)部有水分，當(dāng)我開啟槍頭盒后，有水的地方更容易被霉菌的孢子所接觸附著，也就更容易污染，所以，滅菌滅不好，是我的大錯(cuò)。我熟讀并背誦下了這個(gè)滅菌法則，如若再不按規(guī)范操作，我直播吃手機(jī)。

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第七宗罪：細(xì)胞污染了不搶救

明知實(shí)驗(yàn)室條件有限，懷疑細(xì)胞污染了，我從來不搶救，實(shí)在是不懂事，為了表達(dá)我的歉意和悔改的決心，我總結(jié)出了細(xì)胞污染后的急救方法，順便給學(xué)弟學(xué)妹參考，各位且背且珍惜。

首先要判斷污染源，一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染的跡象或已污染，立即判斷可能的污染源：有無操作不當(dāng)？培養(yǎng)基、胰酶、PBS等顏色、澄清度是否正常？

其次要及時(shí)處理，若確定現(xiàn)有的培養(yǎng)基、胰酶、PBS可用，則繼續(xù)使用；若無法確定則新配完全培養(yǎng)基、PBS、胰酶，原有的液體在確定是否污染后再做處理。

如果是霉菌污染，在以PBS潤(rùn)洗2~3遍后換液，無需加入高濃度雙抗。培養(yǎng)48h后污染再次出現(xiàn)時(shí)，再另行加入即可。

如果是真菌污染，在PBS潤(rùn)洗、換液后可加入兩性霉素B（兩性霉素B有細(xì)胞毒性，不推薦使用），也可加入300μg/mL氟康唑培養(yǎng)，污染控制后改用150μg/mL培養(yǎng)2~3代

如果懷疑是支原體污染，則可進(jìn)行PCR檢測(cè)或直接使用支原體清除試劑。也可購(gòu)買環(huán)丙沙星注射液，于超凈臺(tái)內(nèi)打開直接添加到培養(yǎng)基中，以20μg/mL濃度2代后改用10μg/mL濃度持續(xù)培養(yǎng)約2周。

不過，我還是堅(jiān)持認(rèn)為，如若條件允許，細(xì)胞污染后最好的處理方式是：丟棄?。?！

@所有細(xì)胞新手

我相信犯了以上這些養(yǎng)細(xì)胞罪狀的實(shí)驗(yàn)菜狗，不止我一個(gè)人，不止我一個(gè)人，細(xì)胞培養(yǎng)中的常面臨的BUG也遠(yuǎn)不止這些，所以，今天為了給我的檢討收尾，幫大家解決細(xì)胞新手面臨的種種難題，預(yù)防未來更多的細(xì)胞被我們誤傷，耽誤我們發(fā)SCI。

解螺旋決定贈(zèng)送給大家一本書——《細(xì)胞培養(yǎng)（第3版）》里面全方位介紹了細(xì)胞培養(yǎng)的方方面面，實(shí)為一本不錯(cuò)的養(yǎng)細(xì)胞，做實(shí)驗(yàn)的秘籍。

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必讀理由三：補(bǔ)充了細(xì)胞培養(yǎng)新技術(shù)

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必讀理由四：細(xì)胞檢測(cè)相關(guān)的儀器分析技術(shù)

內(nèi)含細(xì)胞檢測(cè)相關(guān)的儀器分析技術(shù)：流式細(xì)胞儀、激光掃描共聚焦顯微鏡、掃描電子電鏡、透射電子電鏡、原子力顯微鏡及活細(xì)胞工作站。

適領(lǐng)人群：

生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等相關(guān)專業(yè)學(xué)生

生物、醫(yī)學(xué)科研相關(guān)從業(yè)人員

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