細(xì)胞培養(yǎng)是研究病毒與研制疫苗的基礎(chǔ)技術(shù)，因此細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、病毒學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域已得到廣泛的應(yīng)用。近年來發(fā)展起來的核移植、細(xì)胞雜交、DNA介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移以及一些物理圖譜的建立，也都需要與細(xì)胞培養(yǎng)緊密結(jié)合。

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細(xì)胞培養(yǎng)一般過程主要包括以下幾點(diǎn)：

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1.準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

2.取材：在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?，經(jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器皿中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的首次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。

3.培養(yǎng)：將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。

4.凍存及復(fù)蘇：為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，zui終保存于液氮中。在J低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

細(xì)胞原代培養(yǎng)的基本步驟：

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原代分離細(xì)胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后，經(jīng)機(jī)械以及消化分離成單個(gè)細(xì)胞或單一型細(xì)胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下，生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細(xì)胞常有不同的細(xì)胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細(xì)胞類型和表達(dá)組織的特異性特征。利用原代細(xì)胞培養(yǎng)做各種實(shí)驗(yàn)，如藥物測(cè)試、細(xì)胞分化及病毒學(xué)方面的試驗(yàn)效果很好。其操作步驟如下：

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1.剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用手術(shù)刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復(fù)剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。

2.消化分離：消化分離的目的是將細(xì)小的組織塊消化分離成細(xì)胞團(tuán)或分散的單個(gè)細(xì)胞，以利于進(jìn)一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

3.培養(yǎng)：細(xì)胞懸液用計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。用培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×105 cells／ml，或?qū)嶒?yàn)所需密度，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細(xì)胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細(xì)胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補(bǔ)加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進(jìn)行傳代。

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細(xì)胞培養(yǎng)如何避免污染，必看秘訣！http://www.abbkine.cn/avoid-contamination-in-cell-culture

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