曾經(jīng)有多少科研達人因為細胞培養(yǎng)的狀態(tài)不好而受到了挫折！曾經(jīng)有多少實驗室因為微生物污染，導致自己精心研發(fā)許久的實驗不得已終止！那么細胞應該如何培養(yǎng)才能讓它們的狀態(tài)正常呢？怎么樣才能避免培養(yǎng)的細胞避免污染呢？

細胞培養(yǎng)也是研究病毒與研制疫苗的基礎技術，因此細胞培養(yǎng)技術在遺傳學、免疫學、腫瘤學、病毒學、分子生物學等領域已得到廣泛的應用。近年來發(fā)展起來的核移植、細胞雜交、DNA介導的基因轉(zhuǎn)移以及一些物理圖譜的建立，也都需要與細胞培養(yǎng)緊密結(jié)合。

下面，Abbkine細胞培養(yǎng)方法給你答案。

細胞培養(yǎng)一般過程主要包括以下幾點：

1.準備工作：準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

2.取材：在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定)，經(jīng)過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養(yǎng)器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。

3.培養(yǎng)：將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。

4.凍存及復蘇：為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。

細胞原代培養(yǎng)的基本步驟：

原代分離細胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后，經(jīng)機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無菌、適當溫度和一定的營養(yǎng)條件下，生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養(yǎng)做各種實驗，如藥物測試、細胞分化及病毒學方面的試驗效果很好。其操作步驟如下：

1.剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用手術刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當?shù)木彌_液再清洗一次。

2.消化分離：消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞，以利于進一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

3.培養(yǎng)：細胞懸液用計數(shù)板進行細胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×105 cells／ml，或?qū)嶒炈杳芏?，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進行傳代。

傳代培養(yǎng)具體操作步驟：

注意事項

1.消化時間：掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷。

2.消化濃度：掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。

細胞凍存的意義

是將細胞放在低溫環(huán)境（液氮），減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用。

細胞復蘇的意義

細胞復蘇，生物學的一種術語，是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養(yǎng)，細胞恢復生長的過程。

細胞培養(yǎng)鏈接：

http://www.abbkine.cn/avoid-contamination-in-cell-culture

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